Titre de l'invention : [Nouveau solvant d’extraction, de solubilisation et/ou de formulation de composés volatiles et non -volatiles d’intérêt en alimentation et santé animale, procédé de préparation et utilisations associées]

[0001 ] [La présente invention concerne un procédé de préparation d’un totum ou d’un filtrat solide et/ou liquide à partir d’une matrice biologique ou partie de matrice biologique et d’un solvant, ainsi que le totum ou le filtrat susceptibles d’être obtenus selon ledit procédé, et ses utilisations.

[0002] Un totum peut être définit comme un mélange d'une matrice végétale préférentiellement sous forme de poudre avec un solvant. Le totum comprend ainsi des composés actifs ou métabolites extraits ou non de la matrice végétale.

[0003] Les composés actifs ou métabolites naturels sont des molécules provenant d’une matrice biologique ou partie de matrice biologique, généralement végétale, dont les activités biologiques et technologiques ont été démontrées et décrites dans la littérature. Ces composés actifs naturels peuvent-être sous forme pure ou contenus dans des extraits. L’intérêt de ces composés actifs peut être établi dans le cadre de l’alimentation et/ou du bien-être et/ou de la santé humaine ou animale. Leur utilisation en tant qu’additifs peut englober différents objectifs, tels que notamment :

l’amélioration de la santé (composés anti-oxydants, anti-inflammatoires, anti microbiens notamment, alcaloïdes et polyphénols),

l’amélioration de l’appétence (composés augmentant la palatabilité tels que des composés aromatiques, terpènes ou pigments tels que les caroténoïdes ou les chlorophylles),

la contribution à la nutrition (nutriments tels que des protéines, acides aminés, vitamines, oligoéléments...).

[0004] Les métabolites naturels d'origine végétale auxquels il est possible d’attribuer des activités biologiques d’intérêts en alimentation et santé humaine ou animale peuvent appartenir à différentes familles de molécules. Ce sont principalement des métabolites secondaires, qui, contrairement aux métabolites primaires sont non-essentiels, de manière directe, à la nutrition, à la croissance et au développement de la plante (Verpoorte, 2000, Secondary metabolism. In Metabotic engineering of plant secondary metabolism (pp. 1-29). Springer, Dordrecht). Ce sont des composés dont les voies de biosynthèse sont assez spécifiques d’un groupe taxonomique et qui participent en général aux mécanismes d’interaction entre la plante et son environnement (défense, résistance et réponses à des stresses abiotiques et biotiques, symbioses, allélopathie...).

[0005] Il existe différentes familles de métabolites secondaires d’intérêts en alimentation et santé animale.

[0006] Tout d’abord les alcaloïdes (composés généralement alcalins et qui comportent au moins un atome d'azote). Ce sont des composés qui possèdent en général une activité biologique importante, notamment une action sur le système nerveux central et/ou périphérique (stimulant ou dépresseur), notamment comme anesthésiants, comme hypertenseurs ou anti-hypertenseurs, comme antipaludéens ou encore comme anticancéreux.

[0007] Les alcaloïdes sont généralement regroupés en fonction de leur noyau (non hétérocyclique, dérivé de l’indole, du pyrrole, de la pyridine, du tropane...). Parmi les alcaloïdes, on retrouve des molécules très connues telles que la caféine, la morphine, la pi péri ne, la nicotine, l’atropine, la scopolamine ou encore la quinine.

[0008] Les capsaïcinoïdes, dont la capsaïcine et la dihydrocapsaïcine peuvent représenter jusqu'à 90% des capsaïcinoïdes totaux. Il s’agit des composants actifs issus du piment qui tont partie du groupe d’alcaloïdes des benzylamines. La consommation de capsaïcine active les récepteurs TRPV1 qui active une sensation de brûlure. Elle stimule de même la production de deux hormones, l’adrénaline et la noradrénaline et possède donc un intérêt thérapeutique étant donné ses propriétés anti-inflammatoires, antioxydantes et antalgiques (Zimmer et al., 2012, Antioxidant and anti-inflammatory properties of Capsfcum baccatum. from traditional use to scientific approach. Journal of Ethnopharmacology, 139(1 ), 228-233).

[0009] Ensuite les pigments de types caroténoïdes (tetraterpènes de couleur jaune, orange ou rouge), dont les carotènes, uniquement composés de carbone et d’hydrogène et les xanthophylles, qui possèdent en plus, des atomes d’oxygène.

[0010] Les chlorophylles (a, b, c1 , c2 et d) sont des pigments présents chez toutes les plantes vertes (terrestres et aquatiques). La chlorophylle a (C ₅₅ H ₇₂ O ₅ MgN ₄ ) reste la forme majoritairement retrouvée dans les feuilles des plantes. [001 1 ] Les anthocyanes sont des pigments hydrosolubles (hétérosides oxygénés) qui vont du rouge au bleu.

[0012] Les curcuminoïdes (pigments orange provenant du rhizome de Curcuma tonga), ont été montrés comme diminuant de manière notable les concentrations en protéine C-réactive, un facteur important de l'inflammation (Sahebkar, Are Curcuminoids Effective C-Reactive Protein-Lowering Agents in Clinical Practice? Evidence from a Meta-Analysis. Phytother Res. 2013 Aug 7. doi: 10.1002/ptr.5045).

[0013] Les flavonoïdes quant à eux peuvent aller d’une couleur rouge à ultra-violet en fonction du pH et correspondent à deux cycles aromatiques reliés par trois carbones.

[0014] Ces différentes classes de pigments ont majoritairement des effets de régulation de l'inflammation, de protection contre la lumière et agissent de même en tant qu’antioxydants (puissants anti-radicaux libres) (Stahl et Sies, Bioactivity and protective effects of natural carotenoids. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Bas/s of D/sease, 1740(2), 101-107).

[0015] L’intérêt de leur utilisation en alimentation animale est notamment de coupler leurs activités antioxydantes avec leur participation à l’amélioration de la qualité visuelle (coloration et aspect) de la formulation du produit, de même qu’à la coloration et à la conservation des produits issus des animaux (chair, oeufs).

[0016] Les terpènes sont également des métabolites secondaires intéressants. Ce sont des composés volatiles dont la structure correspond à un cycle aromatique et qui possèdent des groupements hydroxyles et terpénoïdes. Ils sont à l'origine des propriétés aromatiques de certaines plantes en fonction de leur taxonomie. Selon la littérature, il existerait environ 25 000 structures différentes de terpènes.

[0017] A ceci s'ajoutent les propriétés d’une autre famille qui sont des composants essentiels des huiles essentielles : les phénols.

[0018] Les phénols sont les métabolites qui attribuent aux huiles essentielles leur odeur très caractéristique et leurs activités biologiques.

[0019] Par exemple, l’huile essentielle d'origan est composée majoritairement de thymol (phénol monoterpenoïdes) et de son isomère, le carvacrol et de y- terpinène, dont la présence donne à l'huile essentielle ses propriétés antioxydantes et antimicrobiennes. [0020] Les composés naturels d'origine végétale possèdent des applications très vastes dans les domaines des cosmétiques et de la parfumerie, mais aussi de la santé et de l’alimentation humaine et animale. Leur obtention passe dans un premier temps par la récolte, le séchage, le stockage, et le conditionnement de la matière première végétale. Néanmoins, il est important de noter que les procédés d’extraction (solide/liquide) sont au coeur de différentes controverses.

[0021 ] Des huiles essentielles peuvent-être obtenues par hydrodistillation ou entraînement à la vapeur. D’autres procédés, permettant d'obtenir des extraits plus complexes que les huiles essentielles, sont utilisés tels que la macération à froid, la digestion à chaud, la décoction, la lixiviation, la percolation sous pression ou à froid, ou encore l’infusion...

[0022] Le procédé le plus couramment utilisé reste la formation d'oléorésine par extraction avec des solvants organiques volatiles tels que l’éther de pétrole, l’hexane, l’éther éthylique, l’acétone, le dioxyde de carbone, le benzène ou le toluène.

[0023] Bien que ces solvants permettent une extraction beaucoup plus efficace et moins sélective que l'eau (extraction principalement des composés hydrophiles) et soient facilement éliminés à la fin du procédé par simple évaporation, la plupart d’entre eux sont :

- toxiques, contribuant ainsi à la contamination des sols et des eaux,

- inflammables et

- issus de ressources non-renouvelables.

[0024] Par ailleurs, différentes études ont fait état des risques (cancérigènes et mutagènes notamment) encourus par une exposition prolongée à ces solvants.

[0025] De plus, les procédés employés nécessitent une grande quantité de solvant et d’énergie, nécessaires afin d’atteindre les rendements désirés.

[0026] Récemment, des directives européennes ont été instaurées afin de limiter l’emploi de ce type de solvants dans une vue globale de protection de l'environnement (lutte contre l’effet de serre, la contamination des sols et contre l’épuisement des ressources pétrolières).

[0027] Dans la liste des solvants à limiter, l'hexane est placé tout en haut de l'échelle.

C’est en effet un hydrocarbure saturé en C6 provenant, pour sa commercialisation, de la distillation du pétrole ou de gaz naturel. Il appartient à la catégorie des molécules CMR de type 3 (cancérogène, mutagène et reprotoxique ; liste CMR UE). Il est par ailleurs très inflammable (point éclair 23, 3°C), toxique pour les organismes aquatiques, peut nuire à la fertilité, provoque des irritations cutanées et peut-être mortel en cas d’ingestion ou de pénétration dans les voies respiratoires.

[0028] Compte tenu de ce qui précède, il existe aujourd'hui un besoin de développer ou de trouver de nouveaux solvants ou des solvants alternatifs aux solvants controversés listés ci-dessus.

[0029] Certains solvants alternatifs ont d’ores et déjà été proposés, et peuvent-être être issus de différentes filières (bois, céréales, oléagineuses). Les solvants de type terpéniques sont issus de la distillation d’oléorésines (généralement du pin) ou de sous- produits d’autres industries.

[0030] Ce sont notamment des alcools (C ₆ H ₁₈ O) et des hydrocarbures (C ₆ H ₁₀ ) qui possèdent de nombreuses doubles liaisons.

[0031 ] Toutefois, il existe un frein à l’utilisation de ces dérivés terpéniques, à cause notamment de leur réactivité chimique due à leurs doubles liaisons. Par exemple, le limonène exposé à l’air subit des réactions d’auto-oxydation qui induit la formation de dérivés oxygénés de type hydro-peroxydes, augmentant le caractère allergisant de ce produit et provoquant la formation de radicaux libres.

[0032] C’est le cas notamment du bio-éthanol, obtenu par fermentation de sucres qui proviennent de l’hydrolyse de plantes de grandes cultures ou de co-produits. Sur le même principe sont produits du butanol et du 1 ,3-propanediol. Ce sont des solvants couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutique, le nettoyage et la cosmétique.

[0033] Parmi les agro-solvants, on peut également citer le méthyl-THF, un produit issu du furfural biosourcé (à partir notamment de résidu de maïs et de canne à sucre).

[0034] Il apparaît que les caractéristiques physico-chimiques (caractère lipophile, moins volatile), le coût et les limitations technologiques de production de ces agro-solvants alternatifs reste un obstacle à leur utilisation à l’échelle industrielle.

[0035] Compte tenu de ce qui précède, un problème que se propose de résoudre la présente invention consiste à développer un nouveau procédé de préparation d’un totum ou d’un filtrat solide et/ou liquide à partir d’une matrice biologique ou partie de matrice biologique et d’un solvant qui ne présente pas les inconvénients listés ci-dessus. Autrement dit, par l’utilisation d’un solvant qui soit notamment non toxique et respectueux de l’environnement.

[0036] La solution à ce problème posé a pour premier objet un procédé de préparation d’un totum solide et/ou liquide, qui est un mélange d’une matrice végétale avec un solvant, comprenant:

une première étape de mise en contact par mélange d’une matrice végétale ou partie de matrice végétale avec un solvant ;

au moins une deuxième étape qui est une phase d’extraction, de solubilisation et/ou de formulation dudit mélange ; et

une étape finale de récupération du totum ainsi obtenu ;

caractérisé en ce que le solvant est le glycérol monolaurate.

Préférentiellement, le glycérol monolaurate est utilisé à une température supérieure à 60°C, plus préférentiellement encore supérieure à 63°C.

[0037] Elle a pour deuxième objet un procédé de préparation d’un filtrat solide et/ou liquide comprenant:

une première étape de mise en contact par mélange d’une matrice biologique ou partie de matrice biologique avec un solvant ;

au moins une deuxième étape qui est une phase d’extraction, de solubilisation et/ou de formulation dudit mélange ;

une troisième étape de filtration du mélange obtenu à la deuxième étape ; et

une étape finale de récupération du filtrat ainsi obtenu ;

caractérisé en ce que le solvant est le glycérol monolaurate.

[0038] Elle a pour troisième objet l’utilisation de Glycérol de Monolaurate pris seul ou en mélange avec une ou plusieurs huiles végétales telles que l’huile d’amande douce, l’huile d’arachide, l’huile d'argon, l’huile d’avocat, l’huile de calophyllum, l’huile de carthame, l’huile de colza, l’huile de coprah, l’huile de germes de blé, l’huile de jojoba, l’huile de maïs, l’huile de noisette, l’huile de noyau d’abricot, l’huile d’olive vierge, l’huile de palme, l’huile de pépins de raisins, l’huile de ricin, l’huile de sésame, l’huile de soja, l’huile de tournesol, l’huile de tournesol oléique, l'huile de tournesol non oléique et l'huile hydrogénée de tournesol, à titre de solvant d’extraction, de solubilisation et/ou de formulation.

[0039] Elle a pour quatrième objet un totum ou filtrat susceptible d’être obtenu par le procédé selon l'invention.

[0040] Elle a pour cinquième objet l' utilisation d’un totum ou d’un filtrat selon l'invention, pour la préparation d’une composition alimentaire ou cosmétique.

[0041 ] Enfin, elle a pour dernier objet une composition comprenant un totum ou un filtrat selon l'invention, pour son utilisation pharmaceutique.

[0042] L’invention a pour objet un procédé de préparation d’un totum ou d’un filtrat solide et/ou liquide comprenant du glycérol monolaurate comme solvant.

[0043] De façon surprenante, le Demandeur a pu mettre en évidence que le glycérol monolaurate, monoglycérol d’acide la urique, constituait un solvant alternatif particulièrement avantageux, dont les intérêts sont multiples. Le glycérol monolaurate ou 2,3-dihydroxypropyl décanoate répond à la formule générale suivante :

[0044] Le glycérol monolaurate est un mono-ester d’acide gras naturel dont la composition (plus polaire que certaines huiles végétales) permet une extraction de composés amphiphiles tels que les capsaïcinoïdes. Son utilisation ne revêt aucun risque pour l'homme ou les animaux. Il est connu que son point de fusion est supérieur à 60°C, plus particulièrement 63°C (N° CAS 142-18-7). C’est donc à cette température l'homme du méfier l'utilise comme solvant.

[0045] De plus, il montre des activités antibactériennes, antifongiques et anti inflammatoires prononcées. Il peut être utilisé en tant qu 'agent antimicrobien et inhibe notamment la croissance, in vitro mais aussi in vivo, des souches de Candida. Il agit de même contre la croissance de bactéries Gram+ mais aussi Gram- telles que Staphy/ococcus, Streptococcus, Gardnereiia, Haemophi/us mais aussi Listeria monocytogenes. Il agit également en fant que bactériostatique, contre Baci/ius anthracis, c’est-à-dire qu’il bloque sa croissance sans néanmoins tuer les cellules. Chez Staphy/ococcus aureus, le glycérol monolaurate bloque la production de certaines exo-enzymes et de facteurs de virulence tels que la protéine A, l'a-hémolysine, la b-lacfamase et la toxine 1 responsable du syndrome du choc toxique (TSST-1 ).

[0046] Il diminuerait de même les risques de transmission et plus précisément inhiberait le signal de transduction et la réponse inflammatoire due à l’infection par le VIH- 1 et le SIV.

[0047] Son action sur le cycle inflammatoire a de même été mis en évidence car une diminution parallèle et significative de la quantité de cytokines pro-inflammatoires (IL-8 et TNF-a) a été observée. Le glycérol monolaurate peut de plus agir en synergie avec d’autres produits, tel que des a minog lycosides, notamment dans la destruction de biofilm de souches antibio-résistantes de Staphylocoque doré. En effet, un traitement préalable avec du glycérol monolaurate permettrait d’améliorer la réponse des biofilms aux antibiotiques.

[0048] Le Demandeur a pu mettre en évidence que le glycérol était un candidat intéressant afin de développer un procédé d’extraction de composés actifs d'origine naturelle.

[0049] Pour des raisons de complexité de mise en oeuvre, le glycérol monolaurate n’a jamais été cité pour suppléer un quelconque solvant d’extraction dans un procédé associé.

[0050] En effet, bien que ses propriétés physico-chimiques en fassent un solvant d’extraction de choix, c’est uniquement pour ses propriétés antimicrobiennes et anti-inflammatoires qu’il a été mis en avant jusqu'à présent.

[0051 ] Le glycérol monolaurate, est notamment cité dans la demande internationale WO2017181784 comme additif alimentaire pour des poules pondeuses.

[0052] La demande internationale WO2016169129 décrit également l’utilisation du glycérol monolaurate dans des procédés de fabrication de gel antibactérien à base d’huile comestible. Ses propriétés antimicrobiennes en tont également un composant de choix dans le traitement d’infections virales, fongiques et bactériennes, comme cela est notamment décrit dans la demande internationale

WO2013159029. [0053] En application alimentaire, le glycérol monolaurate est décrit dans un procédé de traitement des fruits et légumes crus. Il s’agit d’une application de 5 secondes à 30 minutes d’une solution à base d’acide lactique et de peroxyde d’hydrogène ou benzoate de sodium ou glycérol monolaurate. Ce procédé vise à réduire la présence de colonies de pathogènes d'origine alimentaire, telles que certaines souches connues d'Escherichia coli. Une émulsion huile-dans-eau antimicrobienne comprenant du monolaurate de glycérol est également décrite dans la demande internationale W09531966. Cette émulsion a été mise au point à des fins pharmaceutiques et montre une action inhibitrice d’une grande variété d’agents infectieux (bactéries, champignons, virus).

[0054] Comme il ressort des paragraphes ci-dessus, il apparaît que le glycérol monolaurate a été mentionné en tant que composant dans des mélanges pour des applications de décontamination d’aliments, de procédés de traitement d'infection (en santé humaine) ou en tant qu’additifs alimentaires. Ses propriétés antimicrobiennes ont été exploitées dans différents domaines d’applications. Mais son utilisation en tant que solvant, dans un procédé complet d’extraction, solubilisation et/ou formulation de matière végétale contenant des métabolites naturels actifs d’intérêt en supplémentation animale n’a jamais été décrit. Son activité antimicrobienne mais aussi ses propriétés physico-chimiques permettant l’extraction d’une large gamme de métabolites font de lui un candidat en tant que solvant intelligent, ou solvactif, combinant une efficacité notable en tant que solvant et apportant au mélange ses propriétés antimicrobiennes et anti inflammatoires décrites en a mont.

[0055] L’invention et les avantages qui en découlent seront mieux compris à la lecture de la description et des modes de réalisation non limitatifs qui suivent, illustrés au regard des figures annexées dans lesquels :

[0056] La figure 1 représente un schéma du procédé selon l’invention utilisant le glycérol monolaurate (GML) en tant que solvant innovant dans l’extraction et/ou la solubilisation et/ou la formulation à partir d’une matrice végétale qui est une plante ou une partie de plante.

[0057] La figure 2 est un schéma représentant les étapes d’obtention de composés naturels actifs selon les procédés connus de l’art antérieur. [0058] La figure 3 est un schéma représentant les étapes d’obtention des composés naturels actifs via l’utilisation du glycérol monolaurate (GML) selon le procédé de l’invention.

[0059] La figure 4 est une image représentant a) de la poudre micronisée de piment avant le procédé ; b) du glycérol monolaurate ; et c) le totum découpé (matrice végétale de piment et glycérol monolaurate chargé en métabolites d’intérêt extraits du piment lors du procédé) obtenu par le procédé selon l'invention.

[0060] La figure 5 est une image représentant a) de la poudre micronisée de paprika avant le procédé ; (a), glycérol monolaurate (b), et c) le totum découpé (matrice végétale de piment et glycérol monolaurate chargé en métabolites d’intérêt extraits du piment lors du procédé) obtenu par le procédé selon l'invention.

[0061 ] L’invention a pour objet un procédé de préparation d’un totum ou d’un filtrat solide et/ou liquide comprenant une première étape de mise en contact par mélange d’une matrice biologique ou partie de matrice biologique avec un solvant qui est le glycérol monolaurate tel que décrit ci-dessus.

[0062] Lors des étapes de solubilisation et extraction dudit procédé, la matrice végétale, qui peut être sous forme de poudre est mise en contact avec le glycérol monolaurate et est chauffée. La durée et la température de chauffage sont optimisées en fonction de la matrice végétale. Préférentiellement, le glycérol monolaurate est utilisé à une température supérieure à 60°C, plus préférentiellement encore supérieure à 63°C, plus préférentiellement encore supérieure à 80°C. Le totum correspond à la somme/totalité de

1 ) glycérol monolaurate ayant été chargé en composés actifs extraits de la matrice végétale (après extraction/solubilisation)

2) la matrice végétale appauvrie en certains composés actifs qu’elle contenait et qui ont été transférés vers le solvant (glycérol monolaurate) lors de l'extraction.

[0063] Le totum forme une seule masse contenant en mélange les produits 1 ) et 2) issus dudit procédé. L'effet thérapeutique et les activités biologiques de la plante totale sont supérieurs à celui de l'un de ses constituants (ensemble cohérent de principes actifs avec des actions synergiques). Il faut considérer que l'effet thérapeutique et les activités biologiques du totum sont encore plus importants étant donné que les molécules actives de la matrice végétale ont été rendues plus disponibles par l'extraction, que les activités biologiques du solvant intelligent, le glycérol monolaurate s’additionnent, ou agissent en synergie avec celles des actifs extraits de la plante. Il taut également considérer que la matrice végétale, dans laquelle certaines molécules intéressantes en termes d’activités sont restées piégées comme dans toute extraction, est conservée dans le totum.

[0064] Le filtrat objet de l'invention est le terme utilisé pour désigner les matières liquides ayant traversé un filtre. Il s’agit donc comme décrit ci-dessus du 1 ) glycérol monolaurate chargé en composés actifs extraits de la matrice végétale. C’est donc la substance obtenue après que le totum ait subi une étape de filtration, permettant de le débarrasser de la poudre de matrice biologique ou de partie de matrice biologique.

[0065] La première étape du procédé objet de l'invention consiste à mettre en contact, par mélange, le solvant qui est le glycérol monolaurate, avec une matrice biologique ou partie de matrice biologique.

[0066] La matrice biologique ou partie de matrice biologique se présente préférentiellement sous forme pulvérulente, c’est-à-dire sous forme d’une poudre de matière sèche.

[0067] De préférence, la matrice biologique ou la partie de matrice biologique est, prise seule ou en mélange, choisie parmi l’absinthe, l’achillée millefeuille, l’ail, l’artemisia, l'artichaut, le basilic, la camomille, la cannelle, le citron, la coriandre, le curcuma, le cyprès, l'eucalyptus, le fenugrec, le frêne (feuilles), le genévrier, le girofle, le laurier, la lavande, le lemon grass, la luzerne, la menthe poivrée, la moutarde blanche, le noyer (feuilles), l'orange, l'origan, l'ortie, le paprika, le piment, le pin, le pissenlit, le poivre, le romarin, la sarriette, la sauge, le serpolet, la tanaisie, le thym, le trèfle, la verge d’or, ou encore des microorganismes ou milieux issus de culture de microorganismes.

[0068] De préférence encore, la matière biologique est une matière végétale. La matière végétale est une plante ou une partie d’une plante telle qu’une feuille, un fruit, une tige, une fleur ou encore une racine. A titre d’exemple non limitatif de matière végétale ou de partie de matière végétale utilisable, on peut citer , pris seuls ou en mélange, l'absinthe, l'achillée millefeuille, l'ail, l'artemisia, l'artichaut, le basilic, la camomille, la cannelle, le citron, la coriandre, le curcuma, le cyprès, l'eucalyptus, le fenugrec, le frêne (feuilles), le genévrier, le girofle, le laurier, la lavande, le lemon grass, la luzerne, la menthe poivrée, la moutarde blanche, le noyer (feuilles), l'orange, l'origan, l'ortie, le paprika, le piment, le pin, le pissenlit, le poivre, le romarin, la sarriette, la sauge, le serpolet, la tanaisie, le thym, le trèfle ou encore la verge d’or.

[0069] Préférentiellement, la matrice biologique ou partie de matrice biologique est une matière végétale ou une partie de matière végétale choisie parmi le piment, le paprika, l’origan et le romarin, pris seuls ou en mélange.

[0070] Comme cela est illustré à la figure 1 , de préférence, le procédé selon l'invention comprend une étape, préalable à la première étape décrite ci-dessus, de séchage et/ou broyage de la matrice biologique ou partie de matrice biologique, qui est avantageusement une matrice végétale ou partie de matrice végétale telle que décrite ci-dessus.

[0071 ] Le procédé objet de l’invention comprend une deuxième étape qui est une phase d’extraction, de solubilisation et/ou de formation du mélange entre la matrice biologique ou partie de matrice biologique et le solvant.

[0072] Comme cela est illustré à la figure 1 , Le Demandeur a pu mettre en évidence que le solvant qui est le glycérol monolaurate pouvait-être utilisé afin d’effectuer trois phases essentielles à l'obtention de composés naturels actifs à partir de matrice biologique ou partie de matrice biologique. Il s’agit des phases d’extraction, de solubilisation et/ou de formulation. Le glycérol monolaurate peut être utilisé afin de réaliser ces trois phases en série, uniquement deux de ces trois phases ou une phase unique indépendamment des autres.

[0073] Selon un mode particulier de réalisation de l’invention, la deuxième étape du procédé selon l’invention comprend au moins deux des trois phases choisies parmi les phases d’extraction, de solubilisation et/ou de formulation dudit mélange. Préférentiellement, les deux phases sont l’extraction et la solubilisation ou l’extraction et la formulation.

[0074] L'étape d’extraction consiste à séparer des éléments (molécules) d’une matrice liquide (extraction liquide/liquide) ou solide (extraction solide/liquide) le plus souvent à l'aide d’un solvant.

[0075] Les méthodes classiques d’extraction varient en fonction de la composition souhaitée de l’extrait : sans solvant de type presse pour les huiles ou des jus, avec des solvants sélectionnés en fonction de leurs propriétés chimiques (polarité...), de leur coût, de leur dangerosité. L’exemple classique est l'extraction à l'hexane ou à l'éthanol dans l'intention de réaliser des oléorésines. L’utilisation de solvants toxiques ou nocifs rend l’étape d’évaporation obligatoire. Selon l'invention, l’éco- extraction avec le glycérol monolaurate permet de conserver le solvant, non nocif et avec des activités biologiques d’intérêt, dans le totum ou le filtrat issus dudit procédé. Les extractions par CO2 supercritique ou par entrainement à la vapeur (cas des huiles essentielles) sont de même couramment utilisées. L’extraction peut être assistée par l’utilisation d’ultrasons ou de microondes.

[0076] L'étape de solubilisation permet de rendre soluble les composés actifs d’intérêt, précédemment extraits et sortis de la matrice, dans le solvant d’extraction, autrement dit dans le cas d’espèce, le glycérol monolaurate. Ceci est facilité par la chaleur, l’agitation et est fortement dépendant des propriétés chimiques des molécules extraites et du solvant utilisé.

[0077] La formulation consiste à mettre en forme de manière homogène le produit issu des étapes d’extraction et solubilisation et contenant les actifs, afin de cibler son domaine d’utilisation. Elle permet in fine de développer un produit pouvant être commercialisé.

[0078] Selon un mode préféré de réalisation de l’invention, la deuxième étape comprend les trois phases d’extraction, de solubilisation et formulation dudit mélange.

[0079] Comme il ressort de la figure 3, la deuxième étape du procédé selon l’invention correspond aux étapes d’extraction, solubilisation organique et formulation des procédés usuels de production d’additifs tels qu’illustrés à la figure 2. Avec le procédé selon l’invention, aucun co-produit, aucun déchet, provenant de la matière végétale elle-même ou du solvant n’est généré.

[0080] Un des avantages de l’utilisation de ce solvant dans ce procédé réside dans la procédure directe 3-phases-en-l de l'extraction/solubilisation/formulation. Comme indiqué ci-dessus, chaque phase (extraction, solubilisation ou formulation) peut être réalisée indépendamment des autres phases en utilisant le monoglycérol laurate en tant que solvant.

[0081 ] De même, seules deux de ces étapes sur trois peuvent être réalisées en utilisant ledit solvant. L’invention concerne dans un premier temps l’utilisation du glycérol monolaurate en tant que solvant. De plus, le Demandeur a, et ce malgré la difficulté de mise en œuvre, pensé au procédé associé à l' utilisation dudit solvant. Les verrous majeurs débloqués par le Demandeur ont été de mettre en œuvre le procédé, d’annihiler toute dégradation des composés extraits par le glycérol monolaurate et de rendre l' extraction/la solubilisation et la formulation efficaces en termes de rendement.

[0082] Le procédé selon l’invention comprend optionnellement une troisième étape de filtration du mélange obtenu à la deuxième étape. Cette étape de filtration permet de récupérer, à l’étape finale un produit final exempt de poudre biologique ou végétale et donc uniquement un solvant chargé qui est un filtrat.

[0083] Alternativement, le procédé ne comprend pas cette étape de filtration. Le produit ainsi récupéré est appelé totum.

[0084] L’intégralité du produit généré par le procédé, que ce soit le totum ou le filtrat, peut être utilisé en alimentation humaine ou animale, préférentiellement en alimentation animale.

[0085] Il taut noter que les matières de base utilisées pour effectuer ledit procédé sont la matière biologique ou végétale et le nouveau solvant proposé : le glycérol monolaurate. Avant réalisation du procédé, les actifs végétaux (métabolites reconnus pour leurs activités biologiques) sont contenus et retenus par la matrice biologique ou végétale (non ou partiellement biodisponibles). Ledit procédé incluant les étapes d’extraction et de solubilisation des actifs végétaux permet de transférer ces métabolites de la matrice végétale vers le glycérol monolaurate. L’extraction et le transfert dans le glycérol monolaurate permet d’augmenter la biodisponibilité de ces actifs et leur absorption lors de leur transit chez l'animal.

[0086] Les différents lieux d’absorption pourront être modifiés grâce à la formulation inclue dans ledit procédé, tn fine, le filtrat (glycérol monolaurate chargé en actifs végétaux) ou le totum, correspondant au reste de matière végétale (qui peut avoir conservé une faible partie de ses actifs végétaux qu’ils soient disponibles ou piégés dans la matrice) et au glycérol monolaurate fortement chargé en métabolites actifs extraits de la matrice végétale et rendus biodisponibles, pourront-être utilisés.

[0087] De préférence, le procédé objet de l'invention comprend les étapes suivantes de : mise en contact de la matrice biologique ou végétale complexe (poudre de matière sèche) avec le solvant (100% de glycérol monolaurate solide) ; mise sous vide (environ 700 mbars afin d'éviter l'oxydation des métabolites d’intérêts) ou non, agitation, chauffage de la matière végétale et du solvant (en fonction des composés d’intérêts, pouvant aller d’environ 80°C à environ 180°C) et ce, pour une durée déterminée en fonction de la matrice végétale (environ 20 minutes à environ 60 minutes) ;

récupération du totum pris en masse, ou la filtration afin de n’ utiliser que le filtrat qui est le solvant chargé.

[0088] Avantageusement, le procédé selon l’invention est facile à mettre en oeuvre car limité en étapes de réalisation, ce qui limite donc les contraintes de temps.

[0089] Le procédé selon l'invention permet également d'éviter une logistique et l'utilisation d’outils complexes. Le fait d'éliminer certaines étapes classiques de l’extraction d’actifs végétaux limite de même la manipulation du matériel et le nettoyage des machines, et s'inscrit une nouvelle fois dans une problématique écologique et de respect de l'environnement. Le matériel, solvant et matières nécessaires à la réalisation du produit final sont peu coûteux et non-dangereux pour le manipulateur, et adaptables en termes de volume.

[0090] L’invention a également pour objet l’utilisation d’un solvant intelligent, dit solvactif, le glycérol monolaurate, dans un procédé unique et 3-étapes-en-l d’extraction, solubilisation et formulation de composés naturels actifs à partir de matrices végétales.

[0091 ] Le glycérol monolaurate peut avantageusement être mélangé à des huiles végétales en ne modifiant pas drastiquement les rendements d’extraction mais en ajoutant des propriétés intéressantes au totum obtenu.

[0092] Plus particulièrement, l’invention a pour objet l’utilisation de Glycérol de Monolaurate pris seul ou en mélange avec une ou plusieurs huiles végétales telles que l’huile d’amande douce, l’huile d’arachide, l’huile d’argan, l’huile d 'avocat, l’huile de calophyllum, l’huile de carthame, l’huile de colza, l’huile de coprah, l’huile de germes de blé, l’huile de jojoba, l’huile de maïs, l’huile de noisette, l’huile de noyau d 'abricot, l’huile d’olive vierge, l’huile de palme, l'huile de pépins de raisins, l’huile de ricin, l’huile de sésame, l’huile de soja, l’huile de tournesol, l'huile de tournesol oléique, l'huile de tournesol non oléique et l'huile hydrogénée de tournesol, à titre de solvant d'extraction, de solubilisation et/ou de formulation.

[0093] Le Demandeur a pu mettre en évidence que le glycérol monolaurate pouvait- être utilisé en tant que solvant à large spectre d'extraction (composés polaires, a polaires, amphiphiles).

[0094] Les propriétés du totum (solvant + matrice végétale dont les composés actifs ont été extraits et solubilisés) peuvent être multiples : antimicrobiennes, anti inflammatoires, antioxydantes, nutritionnelles, ajouts de fragrance, d'arômes ou colorants.

[0095] Le glycérol monolaurate peut transmettre au produit issu dudit procédé (notamment le filtrat) ses propriétés émulsifiantes, un intérêt non négligeable en nutrition et supplémentation animales car pouvant notamment augmenter les performances de croissance ou encore la qualité de la chair chez les animaux d'élevage.

[0096] Le filtrat (solvant chargé) ou le totum peuvent être, matière active et dynamisé par le solvactif qui est le glycérol monolaurate, utilisés en tant qu 'additifs dans des filières telles que l'alimentation ou la santé humaine ou animale.

[0097] Ladite invention propose l'utilisation du glycérol monolaurate en tant que nouveau solvant pouvant, en plus d'être utilisé pour les étapes d'extraction / solubilisation / formulation d'une matrice végétale, être ingéré par les animaux et l'homme et apporter ses propres propriétés d'intérêt au produit final.

[0098] Avantageusement, le procédé basé sur l'utilisation du glycérol monolaurate s'inscrit dans les problématiques actuelles de protection et de respect de l'environnement. L'intérêt in fine de ces procédés d'éco-extraction étant de remplacer les solvants à risque CMR tel que l'hexane.

[0099] Parmi les composés actifs d'intérêt et ciblés, c'est-à-dire préférés, lors de l'application dudit procédé, on peut citer une famille d'alcaloïdes : les capsaïcinoïdes (capsaïcines, dihydrocapsaïcines, nordihydrocapsaïcines).

[0100] Par le procédé selon l'invention, il est également possible d'extraire des pigments de type caroténoïdes (capsanthine, capsorubine, zéaxanthine, b- carotène, b-cryptoxanthine, b-cryptoxanthine, anthéraxanthine) et chlorophylles. [0101 ] La température du procédé pourra être adaptée afin d'extraire et de ne pas détériorer des molécules de types aromatiques et volatiles telles que le p-cymène, g-terpinène, a-pinène, 1 ,8-cineole, cis-sabinène hydrate, linalool, camphor, bornée I, terpinen-4-ol, trans-p-mentha-l (7),8-dien-2-ol, verbénone, bornylacétate, a-terpinéol, carvone, thymol, carvacrol, piperitenone, eugénol, a-ylangene, carvacrol acétate, methyl-eugenol, caryophyllène, a-humulène, cis-calamenene, a-calacorene, caryophyllène oxide, 14-hydroxy-(Z) caryophyllene, abétatriène,

14-hydroxy-9-epi-(E) caryophyllene.

[0102] Par ailleurs, l’ensemble des composés extraits peuvent agir en synergie entre eux et avec le solvactif (solvant intelligent) qui est le glycérol monolaurate, en fonction de leurs propriétés.

[0103] Etant donné les propriétés physico-chimiques du glycérol monolaurate, une gamme étendue de molécules (polaires, a polaires, amphiphiles) peut théoriquement être extraite dans le solvant et contribuer à l'activité biologique du totum. A titre d’exemple non limitatif, on peut citer entre autres composés, des acides gras, des vitamines, des oses ou encore des acides aminés.

[0104] L’invention a également pour objet un totum ou un filtrat, susceptible d’être obtenu par le procédé selon l’invention.

[0105] Le produit final, filtrat ou totum, dès qu’il revient à une température équivalente à la température ambiante, prend généralement en masse et durcit.

[0106] Le totum ou le filtrat possèdent, du fait de la présence du glycérol monolaurate, mais aussi des pigments divers extraits lors du procédés, un aspect lisse, coloré et brillant.

[0107] Dans le cas où la matière végétale extraite proviendrait d’une plante aromatique (romarin ou origan pour n’en citer que deux), le totum pourrait de même posséder l'odeur caractéristique de ces plantes. Le Demandeur a défini l’apport en fermes de propriétés du glycérol monolaurate.

[0108] Dans cette invention, le Demandeur met non seulement à jour l'utilisation d’un nouveau solvant intelligent, dit solvactif et ses intérêts pour des applications en alimentation et santé animale mais démontre de même l' inférét du procédé 3- en-1 -étapes d’extraction/solubilisation organiques/formulation. [0109] Le procédé est adaptable en termes de température, durée de mise en contact matrice végéta le/solvant, et de volume. Ceci rend possible l’extraction d’une certaine palette de composés naturels actifs à partir d’une grande variété d’espèces végétales. Les composés thermosensibles tels que les composés aromatiques de type terpénique peuvent ainsi être extraits et intégrés dans le filtrat ou le totum. Le nouveau solvant proposé est de même thermostable et conserve ses propriétés et sa non-toxicité durant les étapes du procédé.

[01 10] L’invention a également pour objet l’utilisation d’un totum ou d’un filtrat selon l’invention, pour la préparation d’une composition alimentaire ou cosmétique. Ainsi, le filtrat chargé ou le totum peuvent ensuite être formulés selon les besoins et les animaux ciblés et proposés par exemple pour leurs différentes propriétés en tant qu 'additifs alimentaire pour animaux de rente. A titre d’exemples non limitatifs, le filtrat chargé ou le totum se présentent préférentiellement sous forme de poudre, granule, galet, onguent, pâte, capsule, microcapsule ou de comprimé.

[01 1 1 ] Enfin, l’invention a pour dernier objet une composition comprenant un totum ou un filtrat selon l’invention, pour son utilisation pharmaceutique.

Exemples

[0001 ] La présente invention va maintenant être illustrée au moyen des exemples suivants :

Exemple 1 : Mise en œuvre d’un procédé selon l’invention :

[0002] La matrice végétale sous forme de matière sèche est préalablement broyée.

[0003] Environ 20g de matière végétale et environ 20g de glycérol monolaurate (1 /1 ) sont insérés dans un ballon, préférentiellement un ballon à col rodé.

[0004] Le ballon est installé sur un évaporateur rotatif, et son contenu est de préférence protégé de la lumière.

[0005] Une faible rotation (inférieure à 500 rpm, de préférence inférieure à 200 rpm) est ensuite appliquée au ballon.

[0006] La pression à l'intérieur du ballon est préférentiellement fixée :

à partir de 700 mbars, pour les composés sensibles à l’oxydation, à 1000 mbars pour les composés aromatiques notamment.

[0007] Le ballon est ensuite plongé dans un bain chauffant dont la température est comprise entre 80°C et 180°C, en fonction notamment : de la solubilité des métabolites actifs à extraire ;

de la sensibilité thermique de ces métabolites ;

de la durée définie pour appliquer le procédé.

[0008] Le temps de chauffage et d’agitation dépend principalement de la matière végétale et de la température de chauffage. Il peut être fixé entre 20 minutes et 60 minutes.

[0009] Afin d’augmenter l’efficacité en termes de rendement, de temps et d’énergie nécessaires, un optimum de température et de durée peut être défini spécifiquement pour chaque matière végétale en fonction notamment des métabolites actifs ciblés.

Exemple 2 : Application du procédé selon l’invention sur une matrice végétale de piment [Capsicum ) et analyse quantitative des capsaïcinoïdes transférés dans le filtrat obtenu.

[0010] Comme illustré à la figure 4, l’examen du totum obtenu permet de déterminer que le produit résultant du procédé selon l’invention possède un aspect brillant et lisse, une couleur d’un rouge profond et une texture non granuleuse et malléable à chaud.

[001 1 ] Ce totum peut être formulé assez facilement en fonction de l’animal cible et de l’utilisation finale, notamment lors de la réalisation d’un prémix.

[0012] Tel que décrit précédemment, la famille préférentiellement ciblée lors de l’application dudit procédé à une matière végétale tel que le piment est une famille d’alcaloïdes : les capsaïcinoïdes.

[0013] Les analyses montrent que la poudre de piment micronisée utilisée dans ledit procédé contient 121 1 mg/100g de capsaïcinoïdes totaux, réparti en trois molécules principales : la nordihydrocapsaïcine, la capsaïcine, et la dihydroca psaïci ne.

[0014] Comme il ressort du tableau 1 ci-dessous, ceci équivaut à 1 ,2% environ de capsaïcinoïdes dans la matrice végétale.

[0015] En moyenne, 1017,3 mg/100g de filtrat ont été extraits et transférés dans le filtrat c’est-à-dire 84% des capsaïcinoïdes de la matrice végétale en termes de proportion masse/masse. [0016] Il faut noter que le résidu analysé correspond à la matrice végétale de départ prise en masse dans une fraction de glycérol monolaurate solidifié, chargé en composés d 'inférét extraits et n 'ayant pas pu être filtrés.

[0017] L’intérêt du procédé est notamment de pouvoir conserver :

le filtrat chargé en métabolites d’intérêt ; ou

le totum contenant la poudre résiduelle dans laquelle il reste une portion de composés actifs d’intérêts et ledit solvant ayant extrait la plus grande partie des composés actifs ciblés et les rendant biodisponibles lors de l'ingestion.

[0018] L’intérêt biologique des capsaïcinoïdes en supplémentation animale est non négligeable étant donné qu’ils possèdent un panel de propriétés reconnues dans la littérature. Comme il ressort du tableau ci-dessous, la capsaïcine (8-methyl-N- vanillyl-6-nonenamide) représente environ 45% des capsaïcinoïdes totaux, 43,6 % dans la présente étude.

[0019] Elle peut notamment être utilisée commercialement dans la préparation de produits cosmétiques ou d’onguents « chauds » pour ses propriétés antimicrobiennes et piquantes.

[0020] Des extraits de piments sont utilisés en compléments alimentaires dans le cadre de régimes spécifiques et l'activité anti-inflammatoire de la capsaïcine est utilisée dans des crèmes pharmaceutiques.

[0021 ] En agronomie, la résistance à certaines maladies fongiques semble être corrélée à la teneur en capsaïcinoïdes.

[0022] Utilisés sur d’autres cultures, les capsaïcinoïdes ont des effets antimicrobiens et antifongiques, notamment en induisant la stimulation de la synthèse d'enzymes impliquées dans la défense des plantes telles que des chitinases.

Tableau 1 : Contenu en capsaïcinoïdes ( n ord i hyd roca psaïci n e, capsaïcine, d i hyd roca psaïci ne) de la poudre de piment micronisée, des filtrats et des résidus de filtration obtenu par ledit procédé.

[0023] Les résultats sont exprimés en moyenne ± écart-type (n=3). Le résidu correspond à la matrice végétale de départ prise en masse dans le solvant pris en masse, n’ayant pas pu être filtré. Il constitue donc une fraction de poudre végétale et une fraction de solvant chargé en composés extraits.

[0024] Les analyses chimiques afin de doser les capsaïcinoïdes ont été réalisées par UPLC (ACQUITY U P LC® (Waters) - colonne C18 BEH (2,1x50mm)). La défection UV a été faite spécifiquement à 280 nm et le couplage avec un spectromètre de masse a permis d’identifier et de doser la capsaïcine, la dihydrocapsaïcine, et la n ord i hyd roca psaïci n e (grâce au passage des standards), respectivement. Le dosage des caroténoïdes a été réalisé par UPLC et la détection UV spécifiquement à 470 nm. Le couplage à la spectrométrie de masse est réalisé avec le spectromètre décrit ci-dessus équipé d’une source ICPA (Ionisation Chimique à Pression Atmosphérique). Le dosage des composés aromatique a été réalisé quant à lui par GC-MS (Agilent 7890A et 7000A, Santa Clara, USA) avec une colonne de type DB-5 MS de 60 mètres.

Exemple 3 : Simulation COSMO-RS et propriétés physiques du solvant

[0025] Des études de solubilisation de différents composés ont été réalisées par simulation à l’aide du logiciel COSMO-RS permettant de prévoir la solubilisation des substances actives dans l’hexane ou dans le glycérol monolaurate.

[0026] Il apparaît que le glycérol monolaurate extrait mieux les différents composés lorsqu’il est chauffé à des températures supérieures à 100°C.

[0027] Pour l’étude de composés aromatiques, une étude à 80°C a été réalisée afin d’essayer de limiter la dégradation de ces derniers.

[0028] Comme il ressort du tableau 2 ci-dessous, on peut observer que dans l’ensemble le glycérol monolaurate extrait aussi bien voire mieux que l’hexane. Tableau 2 :

Exemple 4 : Application dudit procédé sur une matrice véaétale de paprika

(Capsicum ) et analyse quantitative des caroténoïdes transférés dans le filtrat

[0029] Comme il ressort de la figure 5, l'examen du totum obtenu permet de déterminer que le produit résultant dudit procédé possède une couleur orange sombre, un aspect brillant et lisse et une texture non granuleuse et malléable à chaud.

[0030] Tout comme le totum obtenu lors de l'application du procédé avec le piment, le totum de paprika pourra être transformé assez facilement en fonction de l'animal cible et de la demande lors de la réalisation d’un prémix.

[0031 ] Le tableau 3 ci-dessous détaille la teneur totale en caroténoïdes libres après saponification des échantillons (en mg/g). Les résultats sont exprimés en moyenne ± écart- type (n=3).

Tableau 3 :

[0032] Il ressort de cette exemple que le profil en caroténoïdes des extraits de paprika montre la présence d’esters de caroténoïdes sous forme de monoesters et de diesters.

[0033] Une faible quantité de caroténoïdes sous forme libre est également identifiée dans ces extraits. [0034] Une saponification est réalisée afin de pouvoir quantifier les caroténoïdes. Le caroténoïde neffemenf majoritaire du paprika est la capsanfhine, qui représente près de 56% des caroténoïdes totaux identifiés dans la poudre de paprika.

[0035] Les autres caroténoïdes identifiés sont l’anthéraxanthine (1 1 ,8%), la capsorubine (1 1 ,1 %), la zéaxanthine (9,7%), la b-cryptoxanthine (3,3%), et le b- carotène (8,5%).

[0036] Dans le filtrat obtenu par ledit procédé, 63,5 % des caroténoïdes totaux ont été extraits et transférés et 51 % concernant le caroténoïde majoritaire, la capsanthine.

[0037] Comme à l’exemple ci-dessus pour le piment, il faut noter que le résidu analysé correspond à la matrice végétale de départ prise en masse dans une fraction de glycérol monolaurate solidifié, chargé en composés d’intérêt extrait et n’ayant pas été filtré.

[0038] Ainsi, il apparaît que la conservation du totum à la fin du procédé peut revêtir un intérêt non négligeable.

[0039] Les caroténoïdes peuvent-être utilisés en tant que colorant de la chair et des sous-produits (œufs) en nutrition animale, ce qui représente notamment un avantage pour les consommateurs. Par ailleurs, les caroténoïdes sont de puissants antioxydants qui ont la capacité d’absorber les radiations agressives bleues et d’éviter la production de R OS (Reactive Oxygéné Species) et donc les dommages cellulaires associés.

[0040] Cette activité protectrice des cellules végétales est liée à leur structure (doubles liaisons, groupe céto et parfois cycle à 5 centres).

[0041 ] La présence de ces composés est donc avantageusement ciblée dans ledit procédé.

Exemple 5 : Application dudit procédé sur une matrice végétale d’oriaan et analyse qualitative des composés aromatiques transférés dans le filtrat

[0042] On applique le procédé décrit à l’exemple 1 sur une matrice végétale d'origan.

[0043] Parmi la totalité des métabolites issus de l’origan extraits et identifiés dans l’extrait hexane (=100%), 63,5 % métabolites ont aussi été identifiés dans l’huile essentielle d’origan. Il y donc un recouvrement en terme qualitatif de 63,5% entre l’huile essentielle d'origan et l’extrait d'origan avec un solvant de type hexane. [0044] Parmi la totalité des métabolites issus de l’origan extraits et identifiés dans l’exfrait hexane (=100%), 34,1 % des composés présents ont été de même identifiés dans le filtrat obtenu lors dudit procédé. 34,1% des métabolites extraits dans un extrait hexane (transféré de la matrice vers l’ hexane) ont été transférés de la matrice végétale d'origan vers le glycérol monolaurate. Parmi eux, les métabolites ayant une activité biologique d’intérêt. Le reste des métabolites est conservé dans la poudre‘appauvrie’, elle-même présente dans le totum.

[0045] Comme il ressort du tableau 4 ci-dessous, il s’agit notamment du p-cymène, y- terpinène, cis-sabinène hydrate, linalool, bornéol, terpinen-4-ol, a-terpinéol, carvone, thymol, carvacrol, eugénol, carvacrol acétate, caryophyllene, a- humulène, caryophyllene oxide, 14-hydroxy-(Z) caryophyllene et de l’abétatriène.

[0046] Le carvacrol est le composé majoritaire de l’huile essentielle de cette espèce de romarin et constitue le composé le plus transféré dans le filtrat.

[0047] C’est, avec le thymol, un des composés qui participe majoritairement aux activités biologiques antioxydante et antimicrobienne de l’huile essentielle d'origan.

[0048] D’autres composés, dont le glycérol monolaurate, ont été annotés de manière spécifique dans le filtrat. Ils participent à l’activité biologique du†o†ume\ tont l’intérêt dudit procédé dans la dynamisation du totum.

[0049] Concernant les composés qui n’ont pas été annotés dans le filtrat et l’ont été dans l’exfrait hexane, deux possibilités sont à envisager :

soit qu’ils ne sont pas transférés dans le filtrat

soif qu’ils le sont, mais en quantité trop faible, composés qui serait donc en dessous de la limite de défection du spectromètre de masse.

[0050] Le tableau 4 ci-dessous reprend l’aspect qualitatif du transfert de composés aromatiques à partird’une matrice végétale d'origan dans le filtrat dudit procédé (n=3) en comparaison avec un extrait hexa nique de la matrice végétale de romarin et une huile essentielle de cette même matière végétale.

[0051 ] Dans ce tableau 4, les composés notés fhe, he, h et f respectivement sont des composés non-annotés en utilisant les RI et l' ADAMS, retrouvés dans le filtrat, l’huile essentielle et l’exfrait hexane (fhel -1 1 ), dans l’huile essentielle et l’exfrait hexane de romarin (hel -4), spécifiquement dans l’exfrait hexane (h 1-25) et spécifiquement dans le filtrat (f1 -33). Les « x » représentent la présence qualitative du composé dans l'extrait et les « - », leur absence.

Tableau 4 :

Exemple 8 : Application dudit procédé sur une matrice végétale de romarin et analyse qualitative des composés aromatiques transférés dans le filtrat

[0052] L’examen du filtrat obtenu est concluante étant donné que le filtrat a conservé les arômes spécifiques du romarin (examen olfactif). De même, il est lisse et brillant et d’un vert caractéristique du la matrice végétale de romarin. Il est assez solide afin d’être formulé par la suite (mix) mais aussi assez gras afin d’être facilement ingéré par les animaux de rente.

[0053] Concernant l’application dudit procédé sur le romarin, l’étude effectuée sur les composés aromatiques transférés dans le filtrat a été réalisé de manière qualitative (la mesure correspond au nombre de molécules identifiées et non à leur quantité). Parmi la totalité des métabolites issus du romarin extraits et identifiés dans l’extrait hexane (=100%), 25% des composés présents ont été de même identifiés dans le filtrat obtenu lors dudit procédé. Il s’agit des composés majoritairement présents (en termes de concentration) dans l’extrait hexane et dans la matrice végétale et qui sont responsables de l’activité biologique de la plante. Le reste des métabolites est conservé dans la poudre‘appauvrie’, elle- même présente dans le totum.

[0054] Comme il ressort du tableau 5 ci-dessous, il a avantageusement été possible de retrouver dans le filtrat : de l’a-pinène, 1 ,8-cinéole, linalool, camphre, bornéol, terpinen-4-ol, a-terpinéol, trans-p-mentha-l (7),8-dien-2-ol, verbénone, bornyl acétate, piperitenone, eugénol, a-caryophyllène, a-humulène, cis-calamenene, a-calacorene, 14-hydroxy-9-epi-(E)-caryophyllene, acide hexadécanoïque.

[0055] Concernant les composés qui n’ont pas été annotés, deux possibilités sont à envisager, de même que pour l’origan :

soit qu’ils ne sont pas transférés dans le filtrat

soit en quantité trop faible dans le filtrat, composés qui seraient donc en dessous de la limite de détection du spectre mètre de masse.

[0056] Le tableau 5 ci-dessous reprend l'aspect qualitatif du transfert de composés aromatiques à partir d’une matrice végétale de romarin dans le filtrat dudit procédé (n=3) en comparaison avec un extrait hexa nique de la matrice végétale de romarin. [0057] Les composés notés fh, h, et f respectivement sont des composés non-annotés en utilisant les RI et l'ADAMS, retrouvés dans le filtrat et l' extrait hexane (fhl -16), spécifiquement dans l’exfrait hexane (h 1-75) et spécifiquement dans le filtrat (fl - 29). Les « x » représentent la présence qualitative du composé dans l’extrait en question et les « - », leur absence.

Tableau 5 :

Exemple 9 : Utilisation du alvcérol monolaurate en mélange avec une huile végétale et application dudit procédé pour l’extraction, solubilisation et formulation d’une poudre de paprika

[0058] L’efficacité en termes de rendement de b-carotène de mélanges de glycérol monolaurate et d’huile hydrogénée de tournesol a été testée en appliquant le schéma dudit procédé. Un plan expérimental mettant en jeu différentes températures appliquées audit procédé et différents ratios glycérol monolaurate/huile hydrogénée de tournesol a permis d’évaluer les critères déterminants dans l'efficacité du procédé.

[0059] Comme il ressort du tableau 6, la température est en effet un paramètre modulant significativement (p<0.005, ANOVA) le rendement d’extraction du b- carotène notamment à partir d’une poudre de paprika (Tableau 6).

[0060] A l'inverse, moduler le pourcentage de glycérol monolaurate en mélange avec l'huile hydrogénée de tournesol ne modifie pas significativement le rendement d’extraction dudit procédé (p>0.1 , ANOVA).

[0061 ] Il est donc possible d’utiliser le glycérol monolaurate, le nouveau solvant d’extraction/solubilisation/formulation proposé par le Demandeur, en mélange avec une huile végétale qui peut de même apporter ses propriétés biologiques au filtrat ou au totum obtenu par ledit procédé.

[0062] Le tableau 5 ci-dessous est une ANOVA du plan d’expérience dudit procédé mis en place afin d’évaluer la possibilité d’utiliser le glycérol monolaurate (GML) en mélange avec une huile végétale (l'huile hydrogénée de tournesol) pour l'extraction/solubilisation/formulation du paprika.

Tableau 6 :

Exemple 10 : Utilisation du alvcérol monolaurate et application dudit procédé à une technologie de microondes

[0063] Une expérimentation de chauffage et extraction assistés par micro-ondes a démontré que le glycérol monolaurate était rendu liquide par un chauffage micro-ondes et que les composés de la matière première végétale, que ce soif pour le piment, paprika, origan ou romarin, pouvaient être extraits/solubilisés et formulés en utilisant cette technique d’éco-extraction et en l'intégrant audit procédé.

[0064] Le Demandeur a pu observer que cette technologie permettait un gain de temps et d’énergie pour une qualité similaire des produits obtenus.

Exemple 1 1 : Utilisation du alvcérol monolaurate et application dudit procédé à une technologie d’ultrason

[0065] De la même façon, une expérimentation d’extraction assistée par ultrasons a démontré que ledit procédé utilisant le glycérol monolaurate pouvait intégrer la technologie d’extraction assistée par ultrasons pour l’extraction / solubilisation / formulation d’une matrice végétale de piment, paprika, origan ou romarin.

[0066] L'intégration de cette technologie d’éco-extraction permet de réduire la durée nécessaire audit procédé et donc de réduire parallèlement les coûts énergétiques dudit procédé.