ГЕКСАПЕПТИДА

Изобретение относится к лекарственной форме гексапептида тирозил-О-аланил- глицил-фенилаланил-лейцил-аргин� �на диацетата, предназначенной для ингаляционного внутрилегочного введения пациентам с болезнями легких.

Г есксапептид тирозил-О-аланил-глицил-фенилала нил-лейцил-аргинина диацетат, формула H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH, известен как средство лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, панкреатита и панкреонекроза. Применение даларгина в составе лекарственных средств раскрыто в следующих патентах РФ (NsNs): 2032422, 2241488, 2198641, 2104717, 2270025, 2351334, 2343885, 2405534, 2363455, 2515550, 2180598, 2635083, 2436588, 2473325, 2144831, 2646569, 2200026,

2146530, 2155608, 2185176, 2139725, 2266130, 2326661, 2299742, 2218896, 2416398,

2318503, 2430753, 2299438, 2258529, 2099077, 2122415, 2261713, 2006039, 2366416,

2228762, 2185849, 2496493, 2366417, 2017488, 2167671, 2181564, 2284192, 2290203,

2286793, 2366432, 2299065, 2429002, 2196603, 2142814, 2285522, 2203693, 2230549,

2180591, 2142736, 2113856, 2217139, 2266752, 2261722, 2362580, 2223741, 222814869, 2217186, 2266130, 2326661, 2299742, 2218896, 2672888, 2416398, 2318503, 2430753, 2299438, 2258529, 2099077, 2122415, 2261713, 2006039, 2366416. Наиболее часто используемая лекарственная форма даларгина представляет собой твердый лиофилизат, который растворяют в изотоническом растворе хлорида натрия непосредственно перед внутримышечным или внутривенным введением пациенту, чтобы избежать проблем, связанных с возможной нестабильностью пептида в растворе при хранении. Известна стабильная жидкая лекарственная форма даларгина для инъекций, содержащая даларгин, натрия хлорид и воду для инъекций (патент РФ Ns 2241488), в которой устойчивость (стабильность) даларгина при хранении обеспечивается введением натрия хлорида в состав раствора в качестве стабилизатора и консерванта.

Применение тирозил-О-аланил-глицил-фенилала нил-лейцил-аргинина диацетата для лечения болезней легких ограничено очень низкой абсорбцией этого вещества легкими при инъекционном введении, не более 0,4% от вводимой дозы и временем полувыведения несколько минут. Каленикова ЕИ и др. Фармакокинетика даларгина. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.1988, 34(1): 75-83. Нами обнаружено, что ингаляционное введение водных растворов тирозил-О-аланил-глицил- фенилаланил-лейцил-аргинина диацетата обеспечивает значительный терапевтический эффект при лечении болезней легких, обеспечивает более высокую доставку этого вещества в легкие, чем инъекционное введение, и более удобно для пациентов, чем инъекционное введение. Водные лекарственные формы пептидов подвержены быстрой деградации в растворе при наличии микробной контаминации и/или следов бактериальных пептидаз, поэтому лекарственные формы, содержащие пептиды в качестве основного вещества, часто содержат консерванты и стабилизаторы. Однако, наличие консервантов в ингаляционных лекарственных формах может вызывать ряд нежелательных побочных эффектов таких как кашель, раздражение слизистых оболочек бронхов и бронхоспазм. Kuhn RJ. Formulation of aerosolized therapeutics. Chest. 2001, 120(3 Suppl):94S-98S. Поэтому, целью настоящего изобретения было создание способа производства ингаляционной лекарственной формы гексапепида тирозил-0-аланил-глицил-фенилала� �ил-лейцил- аргинина диацетата без консервантов и стабилизаторов.

Нами установлено, что стабильная ингаляционная лекарственная форма гексапептида в виде водного раствора может быть произведена без использования стабилизаторов и консервантов при включении в производственный процесс технологической стадии стерилизующей фильтрации, исключающей микробную контаминацию и, как следствие, присутствие в растворе бактериальных пептидаз, ответственных за деградацию гекспептида в растворе. При этом, все стадии производства также должны исключить микробную контаминацию лекарственной формы в процессе производства, которая может привести к присутствию в растворе бактериальных пептидаз, которые могут привести к деградации гексапептида в растворе при последующем хранении указанной лекарственной формы.

Настоящее изобретение относится к способу производства лекарственной формы для ингаляционного введения в виде стабильного водного раствора диацетата гексапептида формулы (I)

H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Arg-OH диацетат (I), включающему следующие стадии:

(а) подготовку вентиляционного воздуха с общим содержанием микрорганизмов не более 10 КОЕ/м ³ ;

(б) подготовку воды с общим содержанием микрорганизмов не более 100 КОЕ/л;

(в) растворение гексапептида формулы (I) в воде с общим числом микрорганизмов не более 100 КОЕ/л; и

(г) стерилизующую фильтрацию водного раствора гексапептида формулы (I); и

(д) розлив фильтрованного раствора в стерильную упаковку с герметизацией после разлива.

В предпочтительном воплощении, содержание гексапептида формулы (I) в водном растворе составляет 1 мг/мл. Техническим результатом настоящего изобретения является то, что способ производства настоящего изобретения обеспечивает долговременную стабильность лекарственной формы препарата гексапептида формулы (I) в виде водного раствора для ингаляционного введения без применения в ее составе стабилизаторов и консервантов.

Гексапептид формулы (I), короткое название гексапептид (I), имеет химическое название тирозил-О-аланил-глицил-фенилала нил-лейцил-аргинина диацетат и может быть получен любым способом известным из уровня техники, в частности, твердофазным синтезом. Гексапептид формулы (I), его соли и сольваты коммерчески доступны, например, в каталоге Bachem Ns 4030569.0100 (https://shop.bachem.com/4030569.html). Кроме того, диацетат гексапептида формулы (I) производится в качестве коммерчески доступной фармацевтической субстанции в Российской Федерации несколькими производителями.

Термин «лекарственная форма» означает состояние лекарственного препарата, соответствующее способам его введения и применения и обеспечивающее достижение необходимого лечебного эффекта.

Термин «лекарственный препарат» означает лекарственное средство в виде лекарственной формы, применяемой для профилактики, лечения заболевания, и реабилитации.

Термин «лекарственная форма в виде стабильного водного раствора» означает, что лекарственная форма настоящего изобретения удовлетворяет требованию отсутствия значительных изменений (более 5%) содержания гексапептида (I) по показателю "количественное определение" от первоначального значения, как установлено ГОСТ Р 57129-2016 «Лекарственные средства для медицинского применения. Часть 1. Изучение стабильности новых фармацевтических субстанций и лекарственных препаратов». Срок годности лекарственной формы для ингаляционного введения настоящего изобретения по критерию «стабильность» может быть от 3 до 36 месяцев, предпочтительно не менее 3 месяцев.

В предпочтительном воплощении, лекарственная форма содержит гексапептид (I) и воду при следующем содержании компонентов: гексапептид (I) 1 мг/мл; вода до

100,0 мас.%.

Термин «подготовка вентиляционного воздуха» относится к системе очистки воздуха для его использования в производственных помещениях, где происходит подготовка сырья, приготовление водных растворов, стерилизующая фильтрация и розлив растворов во флаконы или ампулы.

В некоторых воплощениях, подготовка вентиляционного воздуха происходит с использованием оборудования состоящего из приточной системы, вытяжной системы, и ламинарной системы, обеспечивающих уменьшение общего содержания микрорганизмов до уровня не превышающего 10 КОЕ/м ³ . Приточная система включает вентилятор с производительностью достаточной для обеспечения кратности воздухообмена в чистой зоне класса «A/В» не менее 20 и фильтры очистки воздха; вытяжная система включает фильтры выходящего воздуха; ламинарная зона включает конструкцию из фильтромодулей с самостоятельным вентилятором в каждом модуле и автоматическим регулированием потока воздуха, 100% рециркуляцию воздуха рабочей зоны, фильтр тонкой очистки воздуха в каждом фильтромодуле.

Термин «КОЕ» означает колониеобразующие единицы, т.е. показатель количества жизнеспособных микроорганизмов в единице объема или единице массы.

Термин «подготовка воды» относится к системе очистки воды для использования в качестве вспомогательного вещества в составе лекарственной формы настоящего изобретения.

В некоторых воплощениях, подготовка воды происходит с использованием оборудования состоящего из установки для получения воды и конструкций для хранения и раздачи воды, обеспечивающих получение и использование в производстве воды с общим содержанием микрорганизмов не более 100 КОЕ/л (10 КОЕ в 100 мл).

Полученная в результате подготовки вода должна удовлетворять требованиям фармакопеи и нормативных документов РФ и других стран, в частности, требованиям ФС.2.2.0020.15 «вода очищенная»; требованиям ФС.2.2.0019.15 «вода для инъекций»; нормативным документам «Руководство по качеству воды для применения в фармации. Методические рекомендации», Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения и социального развития РФ, 2009» и «CPMP/QWP/158/01 «Note for Guidance on Quality of Water for Pharmaceutical Use», EMEA, 2002»; или любым другим нормативным актам действующим в этой сфере. Предпочтительно, вода в составе лекарственной формы настоящего изобретения выбирается из группы, состоящей из воды очищенной и воды для инъекций.

В одном воплощении, подготовка воды производится с использованием установки для получения воды умягченной, воды очищенной, многоколоночного дистиллятора фармацевтического класса и накопительной емкости для хранения и раздачи воды.

В другом воплощении, подготовка воды производится с использованием установки обратного осмоса-деионизации и накопительной емкости для хранения и раздачи воды.

Термин «стерилизующая фильтрация» означает процесс, при котором водный раствор освобоходается от загрязнения организмами путем прохождения потока раствора через фильтрующий материал. Неэксклюзивные примеры фильтрующих материалов включают фильтр стерилизующий в сборе (Merck Millipore, США), состоящий из префильтра 0,45 мкм и стерилизующего фильтра 0,22 мкм, площадь фильтрации не менее 0,1 м ² , автоклавируемый; фильтр стерилизующий (Merck Millipore, США), состоящий из дыхательного гидрофобного стерилизующего фильтра 0,22 мкм, одноразового, площадь фильтрации не менее 0,02 м ² .

Лекарственная форма настоящего изобретения может содержать вспомогательные вещества. Термин «вспомогательное вещество» означает вещество неорганического или органического происхождения, используемое в процессе производства, изготовления лекарственного препарата для придания ему необходимых физико-химических свойств. Неэксклюзивные примеры вспомогательных веществ включают буферные системы, регуляторы тоничности растворов, поверхностно-активные вещества и эмульгаторы. Подбор вспомогательных веществ для использования в составе лекарственной формы настоящего изобретения может быть осуществлен на основе следующих критериев: вспомогательное вещество не должно влиять на основное терапевтическое действие композиции, не должно быть токсичными в используемых количествах и не должно неблагоприятно воздействовать на функции слизистой оболочки дыхательных путей и ее реснитчатого эпителия. В некоторых воплощениях настоящего изобретения, лекарственные формы могут содержать от 0,001 до 99,999% вспомогательного вещества.

Термин «буферная система» описывает комбинацию кислоты и основания, предпочтительно сопряженного основания, в количествах достаточных для поддержания требуемого уровня pH. Неэксклюзивные примеры фармацевтически приемлемых буферных систем для поддержания pH в интервале от 3,0 до 8,5 описаны в фармакопее РФ (ОФС.1.3.0003.15 «Буферные растворы») и включают ацетатный буфер, цитратный буфер, сукинатный буфер, фосфатный буфер, имидазольный буфер, трис-натрий ацетатный буфер. Диацетат гексапептида (I) также представляет собой буферную систему, содержащую комбинацию уксусной кислоты и ее опряженного основания ацетата в форме моноацетата гексапептида (I), при молярном соотношении кислоты и сопряженого основания 1:1.

В одном из воплощений, лекарственная форма для ингаляционного введения в виде стабильного водного раствора содержит 1 мг/мл гексапептида формулы (I) и имеет pH от 4,8 до 6,8.

В предпочтительном воплощении, лекарственная форма для ингаляционного введения в виде стабильного водного раствора содержит 1 мг/мл гексапептида формулы (I), имеет pH от 4,8 до 6,8, и разливается в стерильную упаковку, выбранную из группы, состоящей из флаконов и ампул. Термин «лекарственная форма для ингаляционного введения» означает лекарственную форму в виде стабильного водного раствора, предназначенную для введения действующего вещества в легкие в виде паров или дисперсий жидких частиц в газовой среде с целью получения эффекта. Размер частиц дисперсии (аэрозоля) составляет от 0,1 до 10 мкм, предпочтительно от 1 до 5 мкм.

В одном из воплощений настоящего изобретения, ингаляционное внутрилегочное введение осуществляется путем распыления с помощью небулайзера.

В одном из воплощений настоящего изобретения, лекарственное средство является дозированным и содержит от 0,1 до 50 мг гексапептида формулы (I) в одной дозе, предпочтительно 10 мг в одной дозе. Термин «доза» означает количество действующего вещества, которое должно быть введено субъекту за один раз.

Термин «небулайзер» обозначает устройство для ингаляций, обеспечивающее преобразование жидкого лекарственного средства для распыления в дисперсию в газовой среде для доставки действующего вещества в легкие. Примеры небулайзеров включают компрессорные, ультразвуковые, либо небулайзеры иного типа.

В одном из воплощений настоящего изобретения, терапевтически эффективное количество стабильного водного раствора вводят субъекту с помощью небулайзера, преобразующего жидкую композицию в дисперсию в газовой среде для доставки действующего вещества в легкие в течение 10-120 мин, предпочтительно от 30 до 90 мин, один раз в день или чаще. Введение может быть однократным или курсовым, курсом до 30 дней.

Следующие примеры демонстрируют изобретение. Примеры иллюстрируют изобретение и не предназначены для ограничения объема изобретения тем или иным образом. Пример !

Таблица 1. Состав лекарственной формы для ингаляционного введения.

В таблице 1 показан состав лекарственной формы для ингаляционного введения в виде стабильного водного раствора настоящего изобретения. Пример 2. Пример иллюстрирует способ производства лекарственной формы для ингаляционного введения в виде стабильного водного раствора.

Подготовка производства.

Санитарная подготовка производства проводится для предотвращения загрязнения микроорганизмами и механическими частицами и включает в себя: подготовку дезрастворов, подготовку производственных помещений, оборудования, а также подготовку персонала и одежды. Для производственных помещений используют дезинфицирующие средства с широким спектром антимикробного действия, которые имеют минимальное время экспозиции и не оставляют следов на обрабатываемых поверхностях. Подготовка производственных помещений включает в себя комплекс мероприятий, состоящий из влажной уборки, дезинфекции и УФ-облучения стен, полов и других поверхностей, направленных на достижение соответствующего класса чистоты помещений.

Подготовка вентиляционного воздуха.

Процесс производства раствора для ингаляций осуществляется в помещениях определенного класса чистоты, нормируемых по содержанию жизнеспособных микроорганизмов и частиц в воздухе. Проведение подготовительных технологических операций осуществляется в помещениях класса чистоты D, приготовление раствора перед фильтрацией осуществляется в помещении класса чистоты С, проведение операций, непосредственно связанных с получением готовой лекарственной формы (асептический розлив), осуществляется в помещениях класса чистоты В, имеющих огражденную зону чистоты А с ламинарным потоком воздуха. Вентиляционный воздух, поступающий в помещения производства, проходит через систему очистки и систему кондиционирования. В помещениях класса чистоты В (с зоной А) создают двадцатикратный (и более) воздухообмен и подпор воздуха относительно наружной атмосферы для создания барьера для проникновения на участок наружных загрязнений с перепадом давления 40-45 Па. Система очистки состоит из фильтров, позволяющих уменьшать в зоне А максимально- допустимое количество частиц размером 0,5 и 5 мкм не более 352 тыс/м ³ и 2,9 тыс/м ³ воздуха, соответственно. Микробиологический контроль проводится при проведении каждого технологического процесса с использованием седиментационного метода. Вентиляционный воздух в чистых помещениях класса В (с зоной А) содержит не более 10 КОЕ/м ³ в расчете на общее содержание микрорганизмов.

Подготовка воды.

Питьевая вода проходит предварительную обработку на установке, состоящую из сетчатого самопромывного фильтра, установки обезжелезивания, накопительных емкостей с повышающей насосной станцией, фильтра тонкой очистки, установки умягчения и установки УФ обеззараживания. Комбинацией обратного осмоса, мембранной дегазации и электродеионизации достигается производство воды очищенной. Установка производства воды очищенной состоит из следующих компонентов: умягчитель, станция декарбонизации, фильтр, установка обратного осмоса, мембранная дегазация, электродеионизация, установки УФ обеззараживания. Для производства воды, соответствующей требованиям ФС.2.2.0019.15 «вода для инъекций», вода очищенная подается на установку дистилляции и подвергается дистилляции. Исследование на содержание микрорганизмов проводят методом мембранной фильтрации в асептических условиях в соответствии с методами ОФС «Микробиологическая чистота», п.12. Для производства лекарственной формы настоящего изобретения используется вода с общим содержанием микрорганизмов не более 100 КОЕ/л (10 КОЕ в 100 мл).

Приготовление раствора гексапептида (I).

Порошок гексапептида (I) смешивают с водой фармакопейного качества с с общим содержанием микрорганизмов не более 100 КОЕ/л (10 КОЕ в 100 мл) в соотношениях, указанных в таблице 1 примера 1, выдерживают 10-15 мин до образования прозрачного раствора. Выход 100% в пересчете на гексапептид (I).

Стерилизующая фильтрация.

Приготовленный прозрачный водный раствор гексапептида (I) подают в фильтрационную установку, состоящую из префильтра 0,45 мкм, стерилизующего фильтра 0,22 мкм (Merck Miilipore, США), дыхательного гидрофобного стерилизующего фильтра, 0,22 мкм (Merck Miilipore, США), автоклавируемой приемной емкости с подающим и приемным патрубком, стерилизованных чистых силиконовых шлангов. Все компоненты поступают в рабочее помещение через передаточный шлюз в защитной упаковке, сохраняющей стерильность. Упаковку удаляют внутри ламинарной зоны А после протирки с наружной стороны стерильным дезинфицирующим средством. Приемную емкость со стерильным раствором передают на розлив путем подсоединения силиконового шланга к разливочной игле машины. Выход 99% в пересчете на гексапептид (I).

Розлив стерильного раствора по флаконам.

Подключают стерильный силиконовый шланг от емкости со стерильным раствором гексапептида (I) к наполняющей игле разливочной машины через перистальтический насос. Получают через передаточный шлюз стерильные флаконы 10R (полезный объем 10 мл) и пробки в защитной упаковке. После наполнения стерильных флаконов стерильным раствором, флаконы герметически укупориваются стерильными пробками в асептических условиях (вентиляционный воздух с общей микробной нагрузкой не более 10 КОЕ/м ³ ). Произведенная лекарственная форма в виде стабильного водного раствора гексапептида (I) во флаконах может быть использована для ингаляционного введения субъекту, нуждающемуся в этом, при помощи небулайзера.

Пример 3

Пример иллюстрирует способ производства ампулированной лекарственной формы для ингаляционного введения в виде стабильного водного раствора.

Подготовка вентиляционного воздуха, подготовка воды, подготовка производства, приготовление раствора гексапептида (I), стерилизующая фильтрация раствора гексапептида (I) производятся как описано в Примере 2 настоящего изобретения.

Розлив стерильного раствора по ампулам.

Подключают стерильный силиконовый шланг от емкости со стерильным раствором гексапептида (I) к наполняющей игле разливочной машины через перистальтический насос. Получают через передаточный шлюз стерильные ампулы 10R (полезный объем 10 мл). После наполнения стерильных ампул стерильным раствором, ампулы герметически укупориваются путем запаивания в асептических условиях (вентиляционный воздух с общей микробной нагрузкой не более 10 КОЕ/мЗ). Произведенная лекарственная форма в виде стабильного водного раствора гексапептида (I) в ампулах может быть использована для ингаляционного введения субъекту, нуждающемуся в этом, при помощи небулайзера.

Пример 4

Пример иллюстрирует стабильность лекарственной формы для ингаляционного введения в виде стабильного водного раствора.

Лекарственная форма для ингаляционного введения в виде стабильного водного раствора с составом, указанным в таблице 1, была приготовлена как описано в примере 2 настоящего изобретения (Лекформа). Контрольный водный раствор гексапептида (I) с тем же составом (Контроль) был приготовлен без соблюдения требований снижения микробной контаминации в технологическом процессе, а именно без соблюдения требований подготовки вентиляционного воздуха с общим содержанием микрорганизмов не более 10 КОЕ/м ³ , подготовки воды с общим содержанием микрорганизмов не более 100 КОЕ/л, растворения гексапептида формулы (I) в воде с общим числом микрорганизмов не более 100 КОЕ/л. Кроме того, стерилизующая фильтрация водного раствора гексапептида формулы (I) не проводилась и розлив раствора производился в нестерильные флаконы, но с герметизацией после разлива. В каждой серии было по пять флаконов. Испытания стабильности проводилось при температуре 25 ± 2°С в течение 12 месяцев. Измерение содержания гексапептида (I) проводилось до (0 мес) и через 12 месяцев после начала испытаний методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным детектированием с применением времяпролетного масс- детектора ВЭЖХ-МС-МС (Agilent 1260, оснащенный автодозатором, с масс-селективным детектором Agilent 6545ХТ Accurate mass Q-TOF LC/MS) в следующем режиме: объемная скорость подвижной фазы через колонку 0,4 см ³ /мин; температура термостата колонки 35°С; объем вводимой пробы 20 мкл; состав подвижной фазы: компонент А - 0,1% раствор муравьиной кислоты с pH 2,5% в воде, компонент Б - ацетонитрил; режим элюирования - градиент: 5% Б (0 - 5 мин), от 5% до 20%Б (5 - 15 мин), 20% Б (15 - 25 мин), 5%Б (25 - 35мин). Результаты испытаний стабильности показаны в таблице 2 как изменение среднего содержания гексапептида (I) в продукте через 12 мес хранения в указанных условиях.

Таблица 2. Исследования стабильности.

Таблица 2 показывает, что лекарственная форма для ингаляционного введения в виде стабильного водного раствора настоящего изобретения была стабильна в течение по меньшей мере одного года, так как в процессе хранения не происходят значимые изменения содержания гексапатида (I) более 5% показателя "количественное определение" от первоначального значения, как установлено ГОСТ Р 57129-2016 «Лекарственные средства для медицинского применения. Часть 1. Изучение стабильности новых фармацевтических субстанций и лекарственных препаратов». Контрольный раствор водный раствор гексапептида (I) с тем же составом, приготовленный без соблюдения требований снижения микробной контаминации в технологическом процессе, в том числе без проведения производственной стадии стерилизующей фильтрации был нестабилен. Таким образом, способ производства настоящего изобретения обеспечивает стабильность лекарственной формы произведенной для ингаляционного введения в виде стабильного водного раствора, не содержащего стабилизаторов и консервантов.

Пример 5.

Пример иллюстрирует эффективность лекарственной формы для ингаляционного введения в виде стабильного водного раствора, не содержащего стабилизаторов и консервантов. Острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС) моделировали на мышах C57BI/6 как описано в D'Alessio FR. Mouse Models of Acute Lung Injury and ARDS. Methods Mol Biol. 2018, 1809:341-350, с модификацией Aoyagi T et al., Shock. 2019, 52(1):83-9. Мышам вводили интратрахеально альфа-галактозилкерамид (1 мкг/мышь) и через 24 часа интратрахеально липополисахарид (ЛПС из E.coli; 300 мкг/мышь). Для оценки эффективности лекарственной формы через 30 мин после введения ЛПС мышам вводили ингаляционно однократно 100 мкг/кг гексапептида (I) в виде свежеприготовленной лекарственной формы из примера 1 (п=6) (Лекформа 0 мес) или лекарственной формы из примера 1, но после 12 мес хранения, как описано в примере 4 (п=6) (Лекформа 12 мес). Еще одна группа мышей с ОРДС получила однократно ингаляцию дистиллированной воды (Контроль). Через 7 часов после введения ЛПС интерлейкин-6 (ИЛ-6) измеряли в водном экстракте легочной ткани, взятой у мышей всех трех групп. Для сравнения, были измерены уровни ИЛ-6 в легочной ткани у интактных здоровых животных (п=6) (Интактные). Измерения проводились на мультиплексном ридере Bio-Plex® MAGPIX™ Multiplex Reader (Bio-Rad, SN: 12250707) с использованием стандартной коммерчески доступной панели (Bio-Plex Pro™ Mouse Cytokine Th17 Panel A 6-Plex #M6000007NY). Экстракт лёгочной ткани, стабилизированный ЭДТА, вносили в лунки планшета. Дальнейшие операции выполняли в соответствии с протоколом производителя. Результаты представлены в таблице 3 как среднее ± ошибка среднего содержания ИЛ-6 в легочной ткани.

Таблица 3.

‘Достоверно отличается от контроля (р<0,05). Достоверно отличается от группы «Интактные» (р<0,05).

Таблица 3 показывает, что ЛПС вызывает достоверное восьмикратное повышение ИЛ-6 в легких у контрольных животных по сравнению с интактными (р<0,05). Ингаляционное введение гексапептида (I) в составе свежеприготовленной лекарственной формы (Лекформа 0 мес) или лекарственной формы после хранения 12 мес (Лекформа 12 мес) достоверно снизило ЛПС-индуцированное повышение уровней ИЛ-6 в легких в 12 и 10 раз, соответственно, причем не было статистически достоверных отличий между группами «Лекформа 0 мес» и «Лекформа 12 мес» (р>0,05). Таким образом, способ производства настоящего изобретения обеспечивает стабильность лекарственной формы для ингаляционного введения в виде стабильного водного раствора, не содержащего стабилизаторов и консервантов, по критерию терапевтической эффективности.