本发明属于医药技术领域， 具体地讲， 本申请涉及碳青霉烯类衍 生物 (4R,5 & 65)-3-[(3&5 5-[[(4-氨基磺酰基苯 -1 -基）曱基]氨曱酰基] -3- 吡咯烷基]硫基 -6-[(R)-l -羟乙基 ]-4-曱基 -7-氧代 - 1-氮杂双环 [3.2.0]庚 -2- 烯 -2-羧酸或其水合物的晶型及其制备方法， 以及其在制备用于治疗和 / 或预防感染性疾病的药物中的应用， 和包括其与一种或多种药用载体 和 /或稀释剂的药物组合物。 背景技术

碳青霉烯类 （ Carbapenems ) 抗生素是 20世纪 70年代发展起来的 新型的 β-内酰胺类抗生素， 由于其具有超广谱、 超强效、 耐酶等特点， 在临床用药中的地位越来越突出。 目前上市的碳青霉浠类抗生素有亚 胺培南 -西司他丁、 帕尼培南 -倍他米隆、 美罗培南、 厄他培南钠、 比阿 培南、 多尼培南。

结构式 （I ) 所示的碳青霉烯类衍生物 (4/?，5 6·^-3-[(3 & 55)-5-[[(4- 氨基磺酰基苯 -1 -基）曱基]氨曱酰基] -3-吡咯烷基]硫基 -6-[(R)-l -羟乙 基 ]_4-曱基 -7-氧代 - 1-氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2-羧酸 （在本说明书中简 称化合物 A， 在 CN200810127480.2 中已有描述）， 主要通过与细菌细 胞膜上的青霉素结合蛋白 （PBPs ) 结合， 抑制细菌细胞壁合成而产生 杀菌作用， 对革兰氏阳性、 阴性菌均有较好的抗菌作用，

在药物研发中晶型研发非常重要， 化合物的晶型不同， 其性盾不 同。 例如晶型不同， 药物的稳定性、 操作性能和溶解度等不同。 因此 替换页 （细则第 26条) 5 本发明人对化合物 A的晶型进行了大量的研究， 由此确认和发明了化 合物 A的晶型。

其中在 CN201010178970.2中已经详细描述过化合物 A的晶型 I， 其在 10.3士 0.2、 14.5士 0.2、 16.3±0·2、 17.1±0.2、 18.0±0.2 20.8±0.2、 21.3±0.2、 22.0士 0.2、 23.3±0.2具有特征峰。 化合物 A的晶型 I虽然在 一定程度上改进了化合物 A的稳定性， 但是仍旧需要进一步改良和提 高化合物 A的稳定性和操作性能。 发明内容

本发明的目的是要解决上述存在的问题， 提供稳定性更好， 操作性 更好和溶解度好的化合物 A的新的晶型及其制备方法与用途。

本发明的一个目的是提供了式（I )所示化合物 A或其水合物的晶 型： 即式 （I ) 所示碳青霉烯衍生物 (4 5 6«S)-3-[(3 & S - ⁵ -^ ⁴ -氨基磺 酰基苯 -1-基）曱基]氨曱酰基] -3-吡咯烷基]硫基 -6-[(R)-l -羟乙基 ]-4-曱基 -7-氧代小氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2-羧酸或其水合物的晶型， 其特征在 于，其使用 Cu-Ka辐射，以 2 角度表示的 X-射线粉末衍射在 18.9±0.2、 19.4±0.2、 21.0±0.2、 21.7±0.2、 23.4士0.2处有特征峰，

所述的化合物 A或其水合物的晶型， 其使用 Cu-Ka辐射， 以 2Θ 角度表示的 X-射线粉末衍射，除上文所述的特征峰以外，� ��在 10.8±0.2、 1 1.8土 0.2、 12.0±0.2 23.7士 0.2处有特征峰。

所述的化合物 A或其水合物的晶型，其 DSC吸收热转变在 105 - 1 17 °C， 最大分解温度约为 170-179 °C。

所述的化合物 A或其水合物的晶型， 其含水量为 6%-10%。

_ 2 .

替换页 （细则第 26条) 本发明人对化合物 A或其水合物的晶型的制备方法做了大量的研 究， 由于化合物 A的分子结构决定了化合物 A是两性物质， 既是酸性 又是碱性的， 因此化合物既可以溶于酸性环境又可以溶于碱 性环境中。 本发明还提供化合物 A或其水合物的晶型的制备方法。

化合物 A的晶型 （以下简称晶型 II )可以通过下述四种方法制得。 方法 1

在化合物 A的悬浮水溶液中加入碱或者碱性溶液调节 pH值至完 全溶解后， 用酸或者酸性溶液调节 pH值至 5.4-7.0， 降至低温， 通过过 滤和干燥， 得到晶体。

方法 2

在化合物 A的悬浮水溶液中加入酸或者酸性溶液调节 pH值至完 全溶解后， 用碱或者碱性溶液调节 pH值至 5.4-7.0, 降至低温， 通过过 滤和干燥， 得到晶体。

方法 3

将化合物 A配成悬浮水溶液， 调节 pH值至完全溶解后， 将此溶 液通过柱色谱吸附富集， 然后用有机溶剂 /水的洗脱液洗脱， 洗脱液减 压蒸熘， 得浓缩后的有机溶剂 /水的混合溶剂， 调节 pH值至 5.4-7.0, 降至低温， 通过过滤和干燥， 得到晶体。

方法 4

将化合物 A配成悬浮水溶液， 调节 pH值至完全溶解后， 加入有 机溶剂 /水的混合溶剂， 调节 pH值至 5.4-7.0, 降至低温， 通过过滤和 干燥， 得到晶体。

所述调节 pH值， 是用酸、 酸性溶液、 碱或者碱性溶液调节 pH值， 如果在洗脱前用酸或者酸性溶液调节 pH值，则洗脱后用碱或者碱性溶 液调节 pH值， 如果在洗脱前用碱或者碱性溶液调节 pH值， 则洗脱后 用酸或者酸性溶液调节 pH值。

上述制备方法 1 -4所述的用酸或者酸性溶液调节 pH值的步骤中， 所述的酸为无机酸或者有机酸， 所述的酸性溶液为有机酸或者无机酸 溶于水后配成的溶液； 其中无机酸选自氢溴酸、 盐酸、 硫酸、 亚石充酸、 硝酸或者磷酸， 优选盐酸； 有机酸选自甲磺酸、 十二烷基硫酸、 2-萘磺 酸、 苯磺酸、 草酸、 2,2-二氯乙酸、 甘油磷酸、 2-羟基乙磺酸、 L-天冬 氨酸、 马来酸、 乙磺酸、 1，5-萘二磺酸、 乙烷 -1，2-二磺酸、 环己基氨基 磺酸或者对曱苯磺酸。

上述制备方法 1-4所述的用碱或者碱性溶液调节 pH值的步骤中， 所述的碱为有机碱或者无机碱， 所述的碱性溶液为有机緘或者无机减 溶于水后配成的溶液； 其中无机碱选自氢氧化鉀、 氢氧化钠、 氢氧化 锌、 氢氧化钙、 碳酸钾、 碳酸氢钾、 碳酸钠或者碳酸氢钠， 优选碳酸 氢钠； 有机碱选自左旋精胺酸、 甜菜碱、 胆碱、 二乙胺、 赖氨酸、 Ν,Ν'- 双苄基乙撑二胺、 2- (二乙基氨基）乙醇、 2-氨基乙醇、 1-(2-羟乙基)吡咯、 二乙醇胺、 二甲基乙醇胺、 Ν-甲基葡萄糖胺、 氨丁三醇、 三乙醇胺、 4-(2-羟乙基)吗啉、 咪唑或者乙二胺。

上述制备方法 3中， 所述的柱色谱为反向柱色谱，选自 C ₄ 柱色谱、 ( ₈ 柱色谱、 C ₁₈ 柱色谱或者树脂柱色谱， 优选 C ₁₈ 柱色谱。

上述制备方法 3 中所述的洗脱液中的有机溶剂以及制备方法 4 中 混和溶剂中的有机溶剂为能与水互溶的有机溶 剂，选自含有 1-4个碳原 子的低级醇， 如甲醇、 乙醇、 丙醇、 异丙醇、 正丁醇、 异丁醇等； 含 有 1-6个碳原子的低级酮， 如丙酮、 丁酮等； 乙腈； 丙腈或者四氢呋喃 等； 优选曱醇、 丙酮、 乙腈。

上述制备方法 3 中， 在所述的洗脱液中， 有机溶剂与水的比例为 1 :0.2〜1 :4， 优选 1 :0.5〜1 :2, 最优选为 1 : 1。

上述制备方法 1-4中， 所述的降至低温是指降至 0〜10°C。

本发明人对化合物 A的晶型的制备方法做了大量研究，研究表明� � 化合物 A的悬浮水溶液调节 pH值完全溶解后， 通过柱色谱吸附富集， 然后用有机溶剂 /水的洗脱液洗脱， 洗脱后， 洗脱液减压蒸熘浓缩， 蒸 出部分洗脱液后， 剩余洗脱液中有机溶剂与水的比例是非常关键 的， 如果有机溶剂的含量较大， 将得到化合物 A的晶型 I, 如果有机溶剂含 量较少， 将得到化合物的晶型 II。

在实际操作中， "洗脱液减压蒸馏浓缩， 直至浓缩后得到一定体 积比的有机溶剂 /水的混合溶剂，， ， 无论混合溶剂是乙腈 /水还是甲醇 / 水， 由于乙腈及甲醇和水存在共沸点， 洗脱液在蒸发时， 将会被一起 蒸出， 而减压蒸出部分洗脱液后， 有机溶剂与水的比例很难定量测定， 所以本发明人为了确定浓缩后的混合溶剂中有 机溶剂与水在达到多少 比例时， 分别能制备得到晶型 I和晶型 II， 本发明人做了一系列的模拟 验证试验， 模拟浓缩后混合溶剂中有机溶剂与水的比例。

当混合溶剂选择乙腈 /水时， 乙腈与水的比例为 60:40时，调节 pH， 降至低温， 通过过滤和干燥， 得到晶体， 而乙腈 /水的比例高于 60:40 时不析晶， 因此乙腈 /水的比例的上限为 60:40， 即为 3:2 (即乙腈含量 为 60% ) ， 在此比例上进行稀释， 本发明人经过大量的实验得出， 如 果混合溶剂中乙腈 /水的比例不低于 1 :9 (即乙腈含量不低于 10% ) , 最 后得到的晶型是晶型 I, 如果混合溶剂中乙腈与水的比例低于 1 :9 (即 乙腈含量低于 10% ) , 则最后得到的晶型是晶型 II。

当混合溶剂选择曱醇 /水时， 曱醇与水的比例为 80:20时，调节 pH， 降至低温， 通过过滤和干燥， 得到晶体， 而甲醇 /水的比例高于 80:20 时不析晶， 因此曱醇 /水的比例的上限为 80:20, 即为 4: 1 (即曱醇含量 为 80% ) ， 在此比例上进行稀释， 本发明人经过大量的实验得出， 如 果混合溶剂中曱醇与水的比例不低于 1 :4时（即甲醇含量不低于 20% ), 最后得到的晶型是晶型 I,如果混合溶剂中甲醇与水的比例低于 1 :4(即 曱醇含量低于 20% ) , 则最后得到的晶型是晶型 II。

因此， 本发明人确定了得到化合物 A晶型 I的混合溶剂的比例为 1 :9-3:2 的乙腈 /水的混合溶剂 （即混合溶剂中乙腈的含量为 10%〜60% 得到晶型 I ) , 或者 1 :4~4: 1的曱醇 /水的混合溶剂 （即混合溶剂中甲醇 的含量为 20%~80%得到晶型 I ) ； 得到化合物 A晶型 II的混合溶剂的 比例为 <1 :9的乙腈 /水的混合溶剂（即混合溶剂中乙腈的含量 <10%时得 到晶型 II ) ， 或者 <1 :4的曱醇 /水的混合溶剂 （即混合溶剂中甲醇的含 量<20%时得到晶型 II) 。

即当采用柱层析的方法时， 洗脱液减压蒸熘， 得到浓缩后的有机 溶剂 /水的混合溶剂， 此时浓缩后的混合溶剂中乙腈 /水的体积比为 1:9〜3:2 (即混合溶剂中乙腈的含量为 10%~60%) , 或者缩后混合溶剂 中甲醇 /水的比例为 1:4~4:1 (即混合溶剂中曱醇的含量为 20%~80%) , 都可以制备得到化合物 A的晶型 I； 浓缩后的混合溶剂中乙腈 /水的体 积比为 <1:9 (即混合溶剂中乙腈的含量 <10%) , 或者缩后混合溶剂中 甲醇 /水的比例为 <1:4 (即混合溶剂中甲醇的含量 <20%) , 都可以制备 得到化合物 A的晶型 II。 当不采用柱层析的方法时， 所用 "有机溶剂 / 水的混合溶剂" ， 是指 1:9〜3:2的乙腈 /水的混合溶剂（即混合溶剂中乙 腈的含量为 10%〜60%) ， 或者 1:4~4:1的甲醇 /水的混合溶剂 （即混合 溶剂中曱醇的含量为 20%~80%) ， 此时都能制备得到化合物 A的晶型 1;<1:9的乙腈 /水的混合溶剂 （即混合溶剂中乙腈的含量 <10%) ， 或者 <1 :4的甲醇 /水的混合溶剂 （即混合溶剂中曱醇的含量 <20%) , 此时都 能制备得到化合物 A的晶型 II。

即上述制备方法 3 中 "浓缩后的有机溶剂和水的混合溶剂" 或上 述制备方法 4中 "有机溶剂 /水的混合溶剂" ， 当有机溶剂为乙腈时， <1:9的乙腈 /水的混合溶剂 （即混合溶剂中乙腈的含量 < 10%)， 或者当 有机溶剂为曱醇时， <1 :4的甲醇 /水的混合溶剂 （即混合溶剂中曱醇的 含量 <20%) , 都能制备得到化合物 A的晶型 II。

综上所述可知， 当采用柱层析的方法时， 洗脱液减压蒸镏蒸出大 部分有机溶剂， 所得的浓缩后的混合溶剂中的有机溶剂占较小 比例时 得晶型 II。 因此， 在实际操作中当减压蒸馏至无溶剂明显蒸出时 停止 蒸馏， 测量可知浓缩后的混合溶剂中有机溶剂含量较 少， 粉末 X-射线 衍射测定， 得到的为晶型 II。

对通过上述方法制得的晶型 II， 进行测定：

( 1 )粉末 X-射线衍射

X衍射测定的条件： Cu-Ka线、 1.54A (单色器） 、 通过 D/MAX-RB 型 X射线衍射仪测得。

使用 Cu-Ka辐射， 以 20角度表示的 X-射线粉末衍射在 18.9士 0.2、 19.4±0.2、 21.0士0.2、 21.7±0.2、 23.4士 0.2 处有较强的特征峰； 还在 10.8士 0.2、 11.8±0.2、 12.0士0.2、 23.7±0.2处有特征峰。

用 X衍射测定本发明的晶型时， 有时由于测定的仪器或测定的条 件， 对于测得的峰而言会稍有测定误差， 因此在确定结晶结构时， 应 该将此误差考虑在内， 因此本申请人在确定 2 »角度时考虑了误差范围 ( ±0.2 ) 。

( 2 ) DSC吸热测定

DSC测定条件： DZ 3335差示扫描量热仪， 氮气保护， 升温速率 5 度 /分钟。

DSC吸收热转变在 105-117 °C， 最大分解温度约为 170-179 °C。

( 3 )单晶衍射测定

单晶衍射的测定条件： Μο/Κα-线束， Bruker CCD ΑΡΕΧ-ΙΙ单晶 衍射仪

根据单晶衍射得到晶型 II的分子结构图， 其单胞参数如下：

( 4 )含水量测定

根据卡尔-费歇尔水分测定法 （简称 K-F法） 测定， 本发明化合物 A或其水合物的含水量在 6%-10%。

本发明还提供化合物 A或其水合物的晶型在制备用于治疗和 /或预 防感染性疾病的药物中的应用。

本发明还提供了一种药物组合物， 其包括化合物 A或其水合物的 晶型与一种或多种药用载体和 /或稀释剂， 所述药物组合物为药学上可 接受的任一剂型， 例如注射剂。 其制成注射剂时， 可根据药物的性质 加入适宜的附加剂， 如渗透压调节剂、 pH值调节剂、 增溶剂、 填充剂、 抗氧剂、 抑菌剂、 乳化剂、 助悬剂等。 附图说明

图 1是化合物 A晶型 II的 X-射线粉末衍射图谱（柱层析法制备， 乙腈 /水作为洗脱液） ， 纵坐标表示衍射强度 （CPS ) ， 横坐标表示衍 射角度 （2Θ ) 。

图 2是化合物 A晶型 II的 X-射线粉末衍射图谱 （柱层析法制备， 丙酮 /水作为洗脱液） ， 纵坐标表示衍射强度 （CPS ) ， 横坐标表示衍 射角度 （2Θ ) 。

图 3是化合物 A晶型 II的 DSC图谱， 纵坐标表示功率 （mW ) ， 横坐标表示温度 （ °C ) 。

图 4是化合物 A晶型 II经单晶衍射得到的分子结构图。 具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步的详细说明 。 这些实施例仅仅 是说明性的， 而不应该理解为是对本发明的范围的限制。 凡基于本发 明上述内容所实现的技术方案及其变体均落入 本发明的范围内。

实施例 1 无定形的化合物 A制备 MAP (原料 3)

原料 1 原料 2 中间体 1

中间体 2 化合物 A

-PNB 代表

, MAP代表

1、 中间体 1的制备例

中间体 1 即 (2& S 2-[(4-氨基磺酰基苯 -1-基)亚甲胺基甲酰基] -4- 巯基 -1- (对硝基苄氧羰基)吡咯烷

将 5- V-(4-硝基苄氧羰基 )-2-硫杂 -5-氮杂双环 [2.2.1]庚 -3-酮（原料 1 ) ( 1600 g, 5.19 mol ) 和醋酸磺胺米隆 (原料 2 ) ( 1219.2 g, 4.95 mol ) 溶于乙腈中， 升温至 40 °C , 氮气保护下， 滴加三乙胺， 搅拌析晶， 过 滤， 得到中间体 1。

2、 中间体 2的制备例

中间体 2 即（4 S&e ^ &S -N-W-硝基苄氧羰基 )-5-[(4-氨基 磺酰基苯 -1-基）甲基]胺曱酰基] 比咯烷基]硫基 -6-[( ?)-1-羟乙基 ]-4-甲 基 _7-氧代 -1-氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2-羧酸 (4-硝基苄基）甲酯

将中间体 1 与 [(4 5 & 65)-3- [(二苯氧膦酰)氧] -6-[(i?)-l-羟乙基 ]-4- 曱基 -7-氧代 -1-氮杂双环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2-羧酸 (4-硝基苄基）曱酯 （原料 3 ) ( 2980 g, 5.01 mol )溶于二曱基曱酰胺中， 降温至 -15 °C , 氮气保 护下， 滴加三乙胺， 反应结束后， 加入乙酸乙酯， 依次用水、 稀盐酸、 饱和碳酸氢钠洗， 无水^ <酸钠干燥有机层， 乙酸乙酯层浓缩回流析晶， 过滤， 干燥得固体（即中间体 2 ) 3300 g, 收率 79.46%, 纯度 94.75%。

3、 化合物 A的制备例

化合物 A 即 (4 5 & 65)-3-[(3 & 55)-5-[[(4-氨基磺酰基苯 -1-基）曱基] 氨曱酰基] -3-吡咯烷基]硫基 -6-[(i?)-l-羟乙基 ]-4-曱基 -7-氧代 -1-氮杂双 环 [3.2.0]庚 -2-烯 -2-羧酸

将中间体 2 ( 500 g, 0.60 mol )溶于四氢呋喃中， 将碳酸氢钠 （ 100 g， 1.19 mol ) , 10%的无水钯炭 100.0 g加入水中， 两溶液置于氢化釜 中混合后， 通入氢气， 加压至 4.0 MPa， 升温至 30 °C搅拌至反应完全， 反应液过滤后用乙酸乙酯洗涤， 水层用醋酸调 pH值为 6， 然后用十八 烷基键和硅胶进行柱层析分离过制备液相进行 纯化分离， 冻干得固体 (即化合物 A ) 145.8 g, 收率 46.32%, 纯度 96.66%。

分子式： C ₂₂ H ₂₈ N ₄ 0 ₇ S ₂

分子量： 524.6

¹ HNMR(D ₂ 0, 400MHz) δ: 1.05(d, 3H), 1.15(d, 3H), 1.97(m, 1H), 2.83(m, 1H)， 3.20(m, 1H), 3.30(m, 1H), 3.33(m, 1H), 3.63(dd, 1H), 3.92(m, 1H), 4.08(m， 1H)， 4.10(m, 1H), 4.40(dd, 1H), 4.45(d, 1H), 7.40(d, 2H), 7.78(d, 2H).

实施例 2 化合物 A晶型 II的制备例一

取 2.03克化合物 A加入 50 mL去离子水， 搅拌制成悬浊液， 然后 用碳酸氢钠固体调节 pH值至完全溶解后，将此溶液用 C ₁₈ 柱色谱富集， 然后用 1 : 1的乙腈 /水的混合溶液洗脱， 洗脱液 30 °C , 30 mmHg真空 度下减压蒸熘至无溶剂明显流出时停止蒸馏， 用 2N盐酸调节 pH值为 6, 于 0-5 °C静置， 得到晶体， 过滤， 冷水洗， 真空干燥得化合物 A晶 型 II 1.37克， 纯度 99.1%, 收率 67%。

"射： 射测定结果示于图 1 中， 结晶在以下^ "射角度

( 2Θ ) 处有衍射峰：

5.14、 7.50、 10.82、 1 1.80、 12.10、 13.14、 16.64、 18.88、 19.46、 20.42、 21.08、 21.74、 23.44、 23.76、 24.52;

DSC分解点： 最大分解温度约为 172 °C ; 含水量 （ K-F法） ： 7.69%。

实施例 3 化合物 A晶型 II的制备例二

取 2.01克化合物 A加入 50 mL去离子水， 搅拌制成悬浊液， 然后 用碳酸氢钠饱和水溶液调节 pH值至完全溶解后， 将此溶液用 C ₁₈ 柱色 语富集，然后用 1 : 1的丙酮 /水的混合溶液洗脱，洗脱液 26 °C , 30 mmHg 真空度下减压蒸馏至无溶剂明显流出时停止蒸 馏， 用 2N盐酸调节 pH 值为 6, 于 0-5 °C静置， 得到晶体， 过滤， 冷水洗， 真空干燥得化合物 A晶型 II 1.10克， 纯度 98.8%, 收率 55%。

XRD衍射： XRD衍射测定结果示于图 2中， 结晶在以下衍射角度 ( 2Θ ) 处有衍射峰：

5.14, 10.80、 11.76、 12.08、 16.62、 18.88、 19.42、 20.42、 21.04、 21.70、 23.36、 23.74;

DSC分解点： 最大分解温度约为 172 °C ;

含水量 （ K-F法） ： 7.60%。

实施例 4 化合物 A晶型 II的制备例三

取 2.05克化合物 A加入 50 mL去离子水，搅拌制成悬浊液，用 1N 盐酸调节 pH值至完全溶解后， 将此溶液用 C ₁₈ 柱色谱富集， 然后用 1 : 1 曱醇 /水的混合溶液洗脱， 洗脱液 30 °C , 30 mmHg真空度下减压蒸 熘至无溶剂明显流出时停止蒸馏，用饱和碳酸 氢钠水溶液调 pH值为 6, 于 0-5 °C静置， 得到晶体， 过滤， 冷水洗， 真空干燥得化合物 A晶型 II 0.92克， 纯度 98.8%, 收率 45%。

XRD衍射： XRD衍射图中， 结晶在以下衍射角度（2Θ )处有衍射 峰：

5.10、 10.76、 1 1.74、 12.06、 18.90、 19.40、 20.36、 21.02、 21.68、 23.38、 23.70、 24.48;

DSC分解点： 最大分解温度约为 173 °C ;

含水量 （ K-F法） ： 7.67%。

实施例 5 化合物 A晶型 II的制备例四 取 2.08克化合物 A加入 50 mL去离子水， 搅拌制成悬浊液， 用碳 酸氢钠饱和水溶液调节 pH值至完全溶解后， 将此溶液用 C ₁₈ 柱色谱富 集， 然后用 1 : 1 甲醇 /水的混合溶液洗脱， 洗脱液 30 30 mmHg 真空度下减压蒸馏至无溶剂明显流出时停止蒸 馏， 用 2N盐酸调 pH值 为 6, 于 0-5 °C静置， 得到晶体， 过滤， 冷水洗， 真空干燥得化合物 A 晶型 II 0.97克， 纯度 99.0%, 收率 46.6%。

单晶的培养参照上述实施例方法，用 2N盐酸调完 pH后，置于 0-10 °C存放 2天得到适合于单晶测试的样品。

XRD衍射： XRD衍射图中， 结晶在以下衍射角度（2Θ )处有衍射 峰：

10.88、 11.84、 12.16、 18.98、 19.52、 21.12、 21.80、 23.48、 23.84;

DSC测定结果： 最大分解温度约为 172 °C， 外推起始分解温度约 为 163 V , 结果示于图 3中； 所得单晶 X射线单晶衍射测定结果示于图 4中， 单胞参数如下：

含水量 （ K-F法） ： 7.57%;

元素分析： 就 C ₂₂ H ₂₈ N ₄ 0 ₇ S ₂ '2H ₂ 0而言

理论值： C 47.13%、 H 5.75%. N 9.99%

实测值： C 47.20%、 H 6.06%, N 10.11%。 实施例 6 化合物 A晶型 II的制备例五

取 2.02克化合物 A加入 20 mL去离子水， 搅拌制成悬浊液， 用碳 酸氢钠饱和水溶液调节 pH至完全溶解后， 过滤， 滤液用 2N盐酸调 pH 值为 6， 于 0-5 °C静置， 得到晶体， 过滤， 冷水洗， 真空干燥得化合物 A晶型 II 1.27克， 纯度 98.0%, 收率 62.9%。

XRD衍射： XRD衍射图中， 结晶在以下衍射角度（2Θ )处有衍射 峰：

10.88、 1 1.86、 12.18、 18.92、 19.52、 21.12、 21.78、 23.50、 23.80; DSC分解点： 最大分解温度约为 172 °C ;

含水量 （K-F法） ： 7.71%。

实施例 7 化合物 A的 II晶型的制备六

取 2.0克化合物 A加入 20 mL水， 常温搅拌下加入 1.25克碳酸氢 钠调节 pH值至完全溶解后， 加入 0.41 mL的甲醇 （体积比， 曱醇 /水 = 1 :49 ) ， 用 2N的盐酸溶液调节 pH=6， 搅拌至析出固体， 过滤， 冷水 洗， 真空干燥， 得化合物 A晶型 II 1.32 克， 收率 66.0%。

XRD衍射： XRD衍射图中， 结晶在以下衍射角度（2Θ )处有衍射 峰：

10.84、 1 1.80、 12.12、 13.16、 18.88、 19.46、 20.40、 21.06、 21.72、 23.44、 23.70、 24.52。

实施例 8 化合物 A的 II晶型的制备七

取 500毫克化合物 A加入 5 mL水， 常温搅拌下加入 0.25克碳酸 氢钠调节 pH值至完全溶解后， 加入 260微升的乙腈 （体积比， 乙腈 / 水 =1 : 19 ) , 用 2N的盐酸溶液调节 pH=6， 搅拌至析出固体， 过滤， 冷 水洗， 真空干燥， 得化合物 A晶型 II 350毫克， 收率 75%。

XRD衍射： XRD衍射图中， 结晶在以下衍射角度（2Θ )处有衍射 峰：

10.74、 1 1.68、 12.04、 18.76、 19.32、 20.90、 21.56、 23.30、 23.56。

实施例 9 化合物 A晶型 II的稳定性考察 本发明人对所得化合物 A的晶型 II 的稳定性进行了考察， 由其结 果可知， 与 CN201010178970.2中描述的化合物 A的晶型 I相比， 本发 明的晶型 II的稳定性优良， 具有稳定性高、 结晶度高、 粒度分布集中、 产品流动性好、 表面光洁等优点。

供试品：

晶型 I： 参考 CN201010178970.2中实施例 1的方法制得， 批号为 20100315-4;

晶型 Π: 由本说明书实施例 2制得， 批号为 040805。

考察条件， 高温 60°C， 放置 5天、 10天后取样， 与放置 0天样品 进行比较， 测定水分、 有关物质、 含量。 在考察期间， 样品用塑料袋 外套铝箔密封包装。

水分测定，按照中国药典 2010版附录 VIII M第一法（卡尔费休氏 法） 进行测定。

含量测定， 按照中国药典 2010版附录 V D高效液相色谱法， 采用 对照品作为外标进行测定。

操作条件

仪器： 高效液相色谱议 （ Agilent 1200 series )

色谱柱： Agilent C ₁₈ , 填料为 5μηι 的十八烷基硅烷化硅胶， 内径 4.6 mm、 柱长 150 mm

柱温： 30 °C

流动相： 0.02 M磷酸氢二铵 （磷酸调 pH=5.2 ) ： 乙腈 =100: 7 流速： 1.0 mL/min

进样量： 10 μΐ

有关物质测定， 按照中国药典 2010版附录 V D高效液相色谱法， 采用面积归一化法进行测定。

操作条件

仪器： 高效液相色谱议 （ Agilent 1200 series )

色谱柱： Agilent C ₁₈ , 填料为 5 μπι的十八烷基硅烷化硅胶， 内径 4.6 mm, 柱长 150 mm

柱温： 30 。C

流动相： A: 0.02 M磷酸氢二铵 （磷酸调 pH=5.2 ) ： 乙腈 =95: 5

B: 0.02 M磷酸氢二铵（磷酸调 pH=5,2 ) ： 乙腈 =30: 70 梯度条件： 见下表 1。

表 1 有关物质测定色谱梯度条件

速： 1.0 mL/min

进样量： 10 μΐ

所得试验结果： 见下表 2。

表 2 稳定性考察结果

备注： 由于化合物 Α易水解， 水解后 β内酰胺环打开， 是主要杂 质， 因此本发明人将开环物的含量作为稳定性考察 的一个因素， 简称 开环物； 开环物％、 增加％是指高温 60°C放置 5天、 10天后开环物与 有关物质的含量与放置 0天时相比增加的量。

由表 2可以看出， 高温 60°C放置 5天、 10天后， 晶型 II开环物增 加的量较晶型 I开环物增加的量小， 晶型 II总杂质含量增加的量较晶 型 I总杂质含量增加的量小；晶型 II水分含量减少的量较晶型 I水分含 量减少的量小； 晶型 II含量减少的量较晶型 I含量减少的量小； 因此 化合物 A的晶型 II与晶型 I相比， 杂质含量增加的少， 水分减少的少， 含量降低的少， 各方面的性质均比晶型 I好， 说明化合物 A的晶型 II 比晶型 I的稳定性更好。

实施例 10 化合物 A晶型 II的注射剂制备例

1、 处方：

化合物 A晶型 II 250 g (按 C ₂₂ H ₂₈ N ₄ 0 ₇ S ₂ 计）

无水碳酸钠 50 g

共制备 1000支 ： ―

2、 工艺步骤：

( 1 )将制备所用的抗生素玻璃瓶、胶塞等进行洗� �、干燥及灭菌处理； (2)开启空调及除湿设备，控制 100级层流室内相对湿度在 50%以内； ( 3 )按处方.称取化合物 A晶型 II及无水碳酸钠， 混合均匀， 得无菌混 合粉末；

(4) 进行半成品检测；

(5) 分装；

(6)力口塞；

(7) 轧盖；

(8) 成品全检；

(9) 包装入库。

实施例 11 化合物 A晶型 II的抗菌活性考察

供试菌种： 以下临床分离菌株由公众机构提供。

革兰阳性菌： 甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA) 、 青霉素敏 感肺炎链球菌；

革兰阴性菌： ESBLs 阴性大肠埃希菌、 ESBLs 阳性大肠埃希菌、 流感嗜血杆菌、 卡他莫拉菌。

供试品： 化合物 A晶型 II。 实验方法： 采用标准琼脂二倍稀释法。

实验结果和结论：

化合物 A晶型 II对临床分离菌株的抗菌活性

MIC _A «(mg/L) MIC ₉₀ (mg/L)

MSSA 0.062 0.062

青霉素敏感肺炎链球菌 0.008 0.031

ESBLs 阴性大肠埃希菌 0.016 0.016

ESBLs 阳性大肠埃希菌 0.016 0.25

流感嗜血杆菌 0.062 0.125

卡他莫拉菌 0.004 0.008

上述实验结果表明， 化合物 A晶型 II对革兰氏阳性菌和革兰氏阴 性菌均具有强效抗菌作用， 且抗菌谱广， 具有很好的临床应用潜力。 以上对本发明进行了详细的描述和说明， 但本发明并不限于此。 所有对本发明的技术方案所作的修饰、 修改、 改进和变化都落入在此 所附的权利要求书所定义的本发明的精神实质 和范围内。